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SOC 培养基(100 mL)
SOC 培养基(100 mL)
基本属性
| 属性 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | SOC 培养基(Super Optimal Broth with Catabolite Repression) |
| 规格 | 100 mL |
| 主要成分 | SOB培养基 + 20 mM 葡萄糖 |
| 保存条件 | 4 ℃短期保存(葡萄糖加入后≤3天) |
| 灭菌方式 | SOB基础培养基高温高压灭菌;葡萄糖溶液0.22 μm过滤除菌 |
| 主要用途 | 转化后细菌复苏培养(提高转化效率) |
配方组成(100 mL体系)
SOB基础培养基(灭菌后使用前加葡萄糖)
| 组分 | 用量(100 mL) | 终浓度 | CAS号 |
|---|---|---|---|
| Tryptone(胰蛋白胨) | 2 g | 2%(W/V) | 91079-40-2 |
| Yeast Extract(酵母提取物) | 0.5 g | 0.5%(W/V) | 8013-01-2 |
| NaCl(氯化钠) | 0.05 g | 0.05%(W/V) | 7647-14-5 |
| KCl(氯化钾) | 0.0186 g | 2.5 mM | 7447-40-7 |
| MgCl₂·6H₂O(使用前添加) | 0.203 g(或0.5 mL 2 M储备液) | 10 mM | 7791-18-6 |
| 葡萄糖(使用前添加) | 0.36 g(或2 mL 1 M储备液) | 20 mM | 50-99-7 |
💡 SOC = SOB + 葡萄糖:SOC培养基即SOB培养基在使用前加入无菌葡萄糖至终浓度20 mM。
配制步骤
第一步:配制SOB基础培养基(100 mL)
称取2 g Tryptone、0.5 g Yeast Extract、0.05 g NaCl,置于200 mL烧杯中。
加入约80 mL去离子水,充分搅拌溶解。
称取0.0186 g KCl,加入烧杯中,搅拌均匀。
滴加5N NaOH调节pH至7.0。
加去离子水定容至100 mL,充分混匀。
高温高压灭菌(121 ℃,15~20 min),冷却至室温备用。
第二步:配制葡萄糖储备液(需单独配制)
称取1.8 g葡萄糖,溶于约8 mL去离子水中,定容至10 mL(即1 M葡萄糖溶液)。
使用0.22 μm滤器过滤除菌(严禁高压灭菌)。
第三步:添加MgCl₂和葡萄糖(使用前)
在超净台内无菌操作,加入0.5 mL 2 M MgCl₂灭菌溶液(终浓度10 mM)。
加入2 mL 1 M葡萄糖过滤除菌溶液(终浓度20 mM)。
充分混匀后4 ℃短期保存(≤3天)。
关键注意事项
⚠️ 葡萄糖不耐高温:葡萄糖溶液严禁高温高压灭菌,必须使用0.22 μm滤器过滤除菌。
⚠️ 葡萄糖防吸潮:葡萄糖易吸潮,称量后立即密封试剂瓶。
⚠️ 葡萄糖现配现用:葡萄糖溶液需现配现用或4 ℃短期保存(不超过3天) ,若出现浑浊、结块需弃用。
⚠️ 温度控制:SOB培养基需提前灭菌冷却至室温,再加入葡萄糖溶液,避免高温导致葡萄糖降解。
⚠️ MgCl₂使用前添加:MgCl₂需在培养基使用前无菌添加,严禁高温高压灭菌。
⚠️ 过滤前检查滤器完整性:过滤前核查0.22 μm滤器完整性,全程无菌操作。
SOB vs SOC 培养基对比
| 比较项 | SOB培养基 | SOC培养基(本方案) |
|---|---|---|
| 基础营养 | Tryptone 2% + Yeast 0.5% + NaCl 0.05% | 同SOB |
| KCl | 2.5 mM | 2.5 mM |
| MgCl₂ | 10 mM(使用前加) | 10 mM(使用前加) |
| 葡萄糖 | 无 | 20 mM(使用前加) |
| 用途 | 感受态制备 | 转化后复苏培养 |
转化后复苏操作流程
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| ① | 热激/电击转化后,立即加入1 mL SOC培养基 |
| ② | 37 ℃振荡复苏培养45~60分钟(转化效率最高) |
| ③ | 取适量菌液涂布含抗生素的选择性平板 |
主要应用
转化后细菌复苏培养(核心应用)
提高质粒DNA转化效率(葡萄糖提供能量,促进抗性基因表达)
感受态细胞活性恢复
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