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SOB 培养基（1 L）
SOB 培养基（1 L）
基本属性
| 属性 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | SOB 培养基（Super Optimal Broth） |
| 规格 | 1 L |
| pH（灭菌前） | 7.0 |
| 保存条件 | 4 ℃密封保存（MgCl₂使用前无菌添加） |
| 灭菌方式 | 高温高压灭菌（基础培养基，121 ℃，15～20 min）；MgCl₂溶液单独灭菌 |
| 主要用途 | 感受态细胞制备（DH5α、TOP10等化学感受态）、高密度培养 |
配方组成（1 L体系）
基础培养基（灭菌后使用前加MgCl₂）
| 组分 | 用量 | 终浓度 | CAS号 |
|---|---|---|---|
| Tryptone（胰蛋白胨） | 20 g | 2%（W/V） | 91079-40-2 |
| Yeast Extract（酵母提取物） | 5 g | 0.5%（W/V） | 8013-01-2 |
| NaCl（氯化钠） | 0.5 g | 0.05%（W/V） | 7647-14-5 |
| KCl（氯化钾） | 0.186 g（或10 mL 250 mM储备液） | 2.5 mM | 7447-40-7 |
| MgCl₂·6H₂O | 2.03 g（或5 mL 2 M储备液） | 10 mM（使用前添加） | 7791-18-6 |
| 5N NaOH | 约0.2 mL | 调pH至7.0 | 1310-73-2 |
| 去离子水 | 定容至1 L | — | — |
配制步骤
第一步：配制储备液
250 mM KCl溶液：称取1.86 g KCl溶于约90 mL去离子水中，定容至100 mL。
2 M MgCl₂溶液：称取19 g MgCl₂·6H₂O（或9.5 g无水MgCl₂）溶于约90 mL去离子水中，定容至100 mL，高温高压灭菌。
第二步：配制基础培养基
称取20 g Tryptone、5 g Yeast Extract、0.5 g NaCl，置于1 L烧杯中。
加入约800 mL去离子水，充分搅拌至完全溶解。
量取10 mL 250 mM KCl溶液，加入烧杯中，搅拌均匀。
滴加5N NaOH（约0.2 mL），调节pH至7.0（缓慢操作，避免过量）。
加去离子水定容至1 L，充分混匀。
高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min），4 ℃保存。
第三步：使用前添加MgCl₂
使用前在超净台内无菌操作，加入5 mL灭菌2 M MgCl₂溶液，充分混匀后使用。
关键注意事项
⚠️ MgCl₂使用前添加：严禁提前加入后共灭菌（高温易导致镁离子沉淀），必须在培养基使用前无菌添加，加药全程超净台内操作。
⚠️ 防吸潮：Tryptone与Yeast Extract易吸潮，称量后立即密封试剂瓶。
⚠️ NaCl精确称量：NaCl仅0.5 g（0.05%），用量小，需精准称量，避免浓度偏差影响菌体生长。
⚠️ pH调节缓慢操作：滴加NaOH后充分混匀再复核，灭菌后pH轻微偏移（≤±0.1）不可二次调节。
⚠️ KCl充分混匀：KCl溶液加入后需搅匀，避免局部浓度过高。
SOB vs LB vs SOC 对比
| 比较项 | LB培养基 | SOB培养基（本方案） | SOC培养基 |
|---|---|---|---|
| Tryptone | 1% | 2%（2倍） | 2% |
| Yeast Extract | 0.5% | 0.5% | 0.5% |
| NaCl | 1% | 0.05%（低盐） | 0.05% |
| KCl | 无 | 2.5 mM | 2.5 mM |
| Mg²⁺ | 无 | 10 mM（使用前加） | 10 mM（使用前加） |
| 葡萄糖 | 无 | 无 | 20 mM（使用前加） |
| 用途 | 常规培养 | 感受态制备 | 感受态复苏 |
使用指南
| 应用 | 使用方式 |
|---|---|
| 感受态细胞制备（DH5α、TOP10等） | 接种单菌落于SOB培养基培养至OD₆₀₀≈0.4～0.6，用于CaCl₂法制备感受态（核心应用） |
| 高密度预培养 | 接种后37 ℃振荡培养，OD₆₀₀可达3～5 |
| SOC培养基制备 | SOB基础 + 使用前加入灭菌葡萄糖至20 mM（终浓度） |
主要应用
感受态细胞制备（化学法/电转化法） （核心应用）
高密度细菌预培养
SOC培养基的基础（添加葡萄糖后成为SOC
