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TB/Amp 培养基（1 L，含氨苄青霉素）
TB/Amp 培养基（1 L，含氨苄青霉素）
基本属性
| 属性 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | TB/Amp 培养基（含氨苄青霉素的Terrific Broth） |
| 规格 | 1 L |
| 磷酸盐缓冲液 | 100 mL（0.17 M KH₂PO₄ + 0.72 M K₂HPO₄） |
| 抗生素 | Ampicillin 100 μg/mL |
| 保存条件 | 4 ℃密封保存（有效期≤3天） |
| 灭菌方式 | 高温高压灭菌（基础培养基+磷酸盐缓冲液单独灭菌）+ 抗生素过滤除菌后添加 |
| 主要用途 | 含氨苄抗性质粒的高密度培养与蛋白高表达 |
配方组成（1 L体系）
基础培养基（灭菌后混合）
| 组分 | 用量 | 终浓度 | CAS号 |
|---|---|---|---|
| Tryptone（胰蛋白胨） | 12 g | 1.2%（W/V） | 91079-40-2 |
| Yeast Extract（酵母提取物） | 24 g | 2.4%（W/V） | 8013-01-2 |
| Glycerol（甘油） | 4 mL | 0.4%（V/V） | 56-81-5 |
| Ampicillin（100 mg/mL储备液） | 1 mL | 100 μg/mL（0.1 mg/mL） | 69-53-4 |
⚠️ CAS号更正：原配方中Glycerol CAS号写为76-81-5，正确CAS号应为56-81-5。
磷酸盐缓冲液（100 mL，单独配制灭菌）
| 组分 | 用量 | 终浓度（缓冲液中） | CAS号 |
|---|---|---|---|
| KH₂PO₄（磷酸二氢钾） | 2.31 g | 0.17 M | 7778-77-0 |
| K₂HPO₄（磷酸氢二钾） | 12.54 g | 0.72 M | 7758-11-4 |
| 去离子水 | 定容至100 mL | — | — |
配制步骤
第一步：配制磷酸盐缓冲液（100 mL）
称取2.31 g KH₂PO₄和12.54 g K₂HPO₄，溶于约90 mL去离子水中。
搅拌至完全溶解后，加去离子水定容至100 mL。
高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min），备用。
第二步：配制基础培养基（1 L）
称取12 g Tryptone、24 g Yeast Extract，量取4 mL Glycerol，置于1 L烧杯中。
加入约800 mL去离子水，充分搅拌至完全溶解（甘油粘稠，沿壁缓慢加入，用少量水冲洗残留）。
加去离子水定容至1 L，充分混匀。
高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min）。
第三步：混合与加药（冷却后）
待基础培养基冷却至60 ℃以下时，在超净台内无菌操作，加入100 mL灭菌磷酸盐缓冲液和1 mL Ampicillin（100 mg/mL） 。
充分混匀后4 ℃密封保存。
关键注意事项
⚠️ Ampicillin不耐高温：必须在培养基冷却至60 ℃以下后加入，加药全程在超净台内无菌操作，防止母液污染及活性丧失。
⚠️ 磷酸盐缓冲液单独灭菌：不可与基础培养基一同灭菌，否则高温下会产生沉淀。
⚠️ 防吸潮：KH₂PO₄与K₂HPO₄易吸潮，称量后立即密封试剂瓶，确保浓度精准。
⚠️ 甘油完全转移：甘油具粘稠性，沿烧杯壁缓慢滴加，用少量去离子水冲洗容器残留以确保完全转移。
⚠️ 有效期：含药培养基4 ℃保存有效期不超过3天，若出现浑浊、沉淀需立即弃用。
TB/Amp vs LB/Amp 对比
| 比较项 | LB/Amp培养基 | TB/Amp培养基（本方案） |
|---|---|---|
| Tryptone | 1%（10 g/L） | 1.2%（12 g/L） |
| Yeast Extract | 0.5%（5 g/L） | 2.4%（24 g/L，4.8倍） |
| 碳源 | 无 | 0.4% Glycerol |
| 缓冲体系 | 无 | 磷酸盐缓冲液（100 mL/L） |
| Ampicillin | 100 μg/mL | 100 μg/mL |
| 菌体产量 | 中等（OD~2） | 高密度（OD 3～5） |
| 蛋白表达产量 | 中等 | 显著提高 |
| 4℃保存期 | ≤3天 | ≤3天 |
| 适用场景 | 常规Amp筛选 | Amp筛选+高密度培养/高表达 |
使用指南
| 应用 | 使用方式 |
|---|---|
| 含Amp抗性菌株高密度培养 | 接种后37 ℃振荡培养，OD₆₀₀可达3～5 |
| 含Amp质粒大量提取 | 高密度培养获得更多菌体，提高质粒产量 |
| 重组蛋白高表达（含Amp筛选） | 高密度培养+IPTG诱导，蛋白产量优于LB/Amp |
| TB/Amp平板制备 | 加入1.5%琼脂粉，灭菌冷却后加缓冲液和Amp倒平板 |
含Amp TB平板制备
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| ① | 配制基础培养基时加入15 g琼脂粉/L |
| ② | 高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min） |
| ③ | 冷却至50～55 ℃，加入100 mL灭菌磷酸盐缓冲液和1 mL Ampicillin（100 mg/mL） |
| ④ | 充分混匀，倒平板（约15～20 mL/皿） |
| ⑤ | 室温凝固后4 ℃避光倒置保存（有效期2～3周） |
主要应用
含氨苄抗性质粒的高密度培养与蛋白高表达（核心应用）
含Amp抗性菌株的质粒大量提取
高密度转化子筛选（优于LB/Amp的菌体产量
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