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TB 培养基（1 L，含磷酸盐缓冲液）
TB 培养基（1 L，含磷酸盐缓冲液）
基本属性
| 属性 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | TB 培养基（Terrific Broth） |
| 规格 | 1 L |
| 磷酸盐缓冲液 | 100 mL（0.17 M KH₂PO₄ + 0.72 M K₂HPO₄） |
| 保存条件 | 4 ℃密封保存 |
| 灭菌方式 | 高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min），磷酸盐缓冲液单独灭菌 |
| 主要用途 | 大肠杆菌高密度培养、重组蛋白高表达、质粒大量提取 |
配方组成（1 L体系）
基础培养基（灭菌后混合）
| 组分 | 用量 | 终浓度 | CAS号 |
|---|---|---|---|
| Tryptone（胰蛋白胨） | 12 g | 1.2%（W/V） | 91079-40-2 |
| Yeast Extract（酵母提取物） | 24 g | 2.4%（W/V） | 8013-01-2 |
| Glycerol（甘油） | 4 mL | 0.4%（V/V） | 56-81-5 |
| 去离子水 | 定容至1 L（含缓冲液总体积） | — | — |
磷酸盐缓冲液（100 mL，单独配制灭菌）
| 组分 | 用量 | 终浓度（缓冲液中） | CAS号 |
|---|---|---|---|
| KH₂PO₄（磷酸二氢钾） | 2.31 g | 0.17 M | 7778-77-0 |
| K₂HPO₄（磷酸氢二钾） | 12.54 g | 0.72 M | 7758-11-4 |
| 去离子水 | 定容至100 mL | — | — |
配制步骤
第一步：配制磷酸盐缓冲液（100 mL）
称取2.31 g KH₂PO₄和12.54 g K₂HPO₄，溶于约90 mL去离子水中。
搅拌至完全溶解后，加去离子水定容至100 mL。
高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min），备用。
第二步：配制基础培养基（1 L）
称取12 g Tryptone、24 g Yeast Extract，量取4 mL Glycerol，置于1 L烧杯中。
加入约800 mL去离子水，充分搅拌至完全溶解（甘油粘稠，沿壁缓慢加入）。
加去离子水定容至1 L，充分混匀。
高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min）。
第三步：混合
待基础培养基冷却至60 ℃以下时，加入100 mL灭菌磷酸盐缓冲液，充分混匀。
4 ℃密封保存。
关键注意事项
⚠️ 磷酸盐缓冲液单独配制灭菌：KH₂PO₄与K₂HPO₄需单独配制并灭菌，不可与基础培养基一同灭菌（防止高温下与其他成分反应产生沉淀）。
⚠️ 防吸潮：KH₂PO₄与K₂HPO₄易吸潮，称量后及时密封试剂瓶，确保浓度精准。
⚠️ 甘油转移：甘油具粘稠性，称量时沿烧杯壁缓慢加入，用少量去离子水冲洗残留，确保完全转移。
⚠️ 温度控制：培养基灭菌后需冷却至60 ℃以下再加入缓冲液，防止高温破坏缓冲体系稳定性。
⚠️ 磷酸盐沉淀：若混合后出现沉淀，可能是缓冲液温度过高或水质硬度问题，应检查操作并重配。
LB vs TB 培养基对比
| 比较项 | LB培养基 | TB培养基（本方案） |
|---|---|---|
| Tryptone | 10 g/L（1%） | 12 g/L（1.2%） |
| Yeast Extract | 5 g/L（0.5%） | 24 g/L（2.4%） |
| 碳源 | 无 | 0.4% Glycerol |
| 缓冲体系 | 无（需外部调节pH） | 磷酸盐缓冲液（100 mL/L） |
| 菌体产量 | 较低 | 高密度（2～3倍于LB） |
| 适用场景 | 常规培养 | 高密度培养、蛋白高表达 |
使用指南
| 应用 | 使用方式 |
|---|---|
| 重组蛋白高表达 | 接种后37 ℃振荡培养，OD₆₀₀可达3～5 |
| 质粒大量提取 | 高密度培养获得更多菌体，提高质粒产量 |
| 感受态细胞制备 | 作为高密度预培养培养基 |
主要应用
大肠杆菌高密度培养（核心应用）
重组蛋白高表达（TB培养基提供更丰富营养，蛋白产量优于LB）
质粒DNA大量提取（高密度菌体→高质粒产量）
生物发酵预培养
