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LB/Amp 培养基（1 L，含氨苄青霉素）
LB/Amp 培养基（1 L，含氨苄青霉素）
基本属性
| 属性 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | LB/Amp 培养基（含氨苄青霉素LB培养基） |
| 规格 | 1 L |
| pH（灭菌前） | 7.0 |
| 抗生素 | Ampicillin 100 μg/mL |
| 保存条件 | 4 ℃密封保存（有效期≤3天） |
| 灭菌方式 | 高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min）+ 抗生素过滤除菌后添加 |
| 主要用途 | 含氨苄抗性质粒的转化子筛选与扩增培养 |
配方组成（1 L体系）
| 组分 | 用量 | 终浓度 | CAS号 |
|---|---|---|---|
| Tryptone（胰蛋白胨） | 10 g | 1%（W/V） | 91079-40-2 |
| Yeast Extract（酵母提取物） | 5 g | 0.5%（W/V） | 8013-01-2 |
| NaCl（氯化钠） | 10 g | 1%（W/V） | 7647-14-5 |
| Ampicillin（100 mg/mL储备液） | 1 mL | 100 μg/mL（0.1 mg/mL） | 69-53-4 |
| 5N NaOH | 约0.2 mL | 调pH至7.0 | 1310-73-2 |
| 去离子水 | 定容至1 L | — | — |
配制步骤
称取10 g Tryptone、5 g Yeast Extract、10 g NaCl，置于1 L烧杯中。
加入约800 mL去离子水，充分搅拌至完全溶解。
滴加5N NaOH（约0.2 mL），调节pH至7.0。
加去离子水定容至1 L，充分混匀。
高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min），冷却至室温。
在超净台内无菌操作，加入1 mL Ampicillin（100 mg/mL） ，充分混匀。
4 ℃密封保存。
关键注意事项
⚠️ Ampicillin不耐高温：需在培养基冷却至室温（≤40 ℃） 后加入，加药全程在超净台内无菌操作，防止母液污染及活性丧失。
⚠️ 有效期：含药培养基4 ℃保存有效期不超过3天，启用后需无菌取用。
⚠️ 污染判断：若出现浑浊、沉淀，需立即弃用。
⚠️ Ampicillin光敏感性：含Ampicillin的培养基建议避光保存（光加速Ampicillin降解）。
⚠️ 避免反复冻融：Ampicillin在反复冻融中降解加速，培养基不可反复冻融。
LB vs LB/Amp 对比
| 比较项 | LB培养基 | LB/Amp培养基（本方案） |
|---|---|---|
| 基础营养 | Tryptone+Yeast+NaCl | Tryptone+Yeast+NaCl |
| 抗生素 | 无 | 100 μg/mL Ampicillin |
| 保存期 | ≤7天 | ≤3天 |
| 用途 | 常规大肠杆菌培养 | 含Amp抗性质粒筛选 |
使用指南
| 应用 | 使用方式 |
|---|---|
| 含Amp抗性转化子筛选 | 涂布转化后的菌液，37 ℃过夜培养 |
| 含Amp质粒扩增 | 接种单菌落至液体LB/Amp，37 ℃振荡培养 |
| LB/Amp平板制备 | 加入1.5%琼脂粉，灭菌冷却后加Amp倒平板 |
含Amp LB平板制备
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| ① | LB/Amp培养基配制前加入15 g琼脂粉/L |
| ② | 高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min） |
| ③ | 冷却至50～55 ℃，加入1 mL Ampicillin（100 mg/mL） |
| ④ | 充分混匀，倒平板（约15～20 mL/皿） |
| ⑤ | 室温凝固后4 ℃避光倒置保存（有效期2～4周） |
主要应用
含氨苄抗性质粒的转化子筛选（核心应用）
含Amp抗性菌株的液体培养与质粒扩增
蓝白斑筛选平板制备（与IPTG/X-gal配合使用
