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40%(W/V)丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺溶液(19:1)(1 L)
40%(W/V)丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺溶液(19:1)(1 L)
基本属性
| 属性 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 40%(W/V)丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺溶液(19:1) |
| 规格 | 1 L |
| 总浓度 | 40%(W/V) |
| 交联度(Acrylamide:BIS) | 19:1 |
| pH | 5.0~6.5(未调节) |
| 保存条件 | 4 ℃避光保存(棕色瓶),不可冷冻 |
| 灭菌方式 | 0.45 μm 滤器过滤(不可高压灭菌) |
| 主要用途 | DNA/RNA PAGE、小分子蛋白分离 |
配方组成(1 L体系)
| 组分 | 用量 | 终浓度 | CAS号 |
|---|---|---|---|
| 丙烯酰胺(Acrylamide) | 380 g | 38%(W/V) | 79-06-1 |
| 甲叉双丙烯酰胺(BIS) | 20 g | 2%(W/V) | 110-26-9 |
| 去离子水 | 定容至1 L | — | — |
配制步骤
称取380 g 丙烯酰胺(Acrylamide) 和20 g 甲叉双丙烯酰胺(BIS) ,置于1 L烧杯中。
加入约600 mL去离子水,充分搅拌至完全溶解。
用去离子水定容至1 L,充分混匀。
使用0.45 μm滤器过滤除去不溶性杂质。
转移至棕色瓶中,4 ℃避光保存。
19:1 vs 29:1 交联度选择指南
| 交联度(Acrylamide:BIS) | 凝胶孔径 | 推荐应用 |
|---|---|---|
| 19:1(本方案) | 较小,更致密 | DNA/RNA PAGE、小分子蛋白(<10 kDa)、测序胶 |
| 29:1(标准蛋白胶) | 较大,较疏松 | 常规SDS-PAGE蛋白电泳(10~200 kDa) |
| 37.5:1 | 最大,最疏松 | 超大分子蛋白电泳、某些特殊应用 |
💡 选择建议:19:1交联度产生的凝胶孔径更小,是DNA PAGE和寡核苷酸分离的首选,也适用于小分子量蛋白(<10 kDa)的Tricine-SDS-PAGE。
关键注意事项
⚠️ 神经毒性警示:丙烯酰胺为神经毒物,可通过皮肤吸收,毒性具有积累性。配制时必须佩戴手套、护目镜,在通风橱内操作。
避光保存:丙烯酰胺见光分解,必须使用棕色瓶保存。
不可冷冻:冷冻导致单体析出结晶,不可冷冻保存。
过滤除杂:使用0.45 μm滤器过滤,去除未溶解颗粒和杂质。
不可高压灭菌:高温导致丙烯酰胺聚合,严禁高压灭菌。
凝胶配制参考(DNA PAGE)
| 凝胶浓度 | 40%丙烯酰胺用量(10 mL体系) | 适用DNA大小范围 |
|---|---|---|
| 6% | 1.5 mL | 100 bp~1 kb |
| 8% | 2.0 mL | 50~600 bp |
| 10% | 2.5 mL | 20~400 bp |
| 12% | 3.0 mL | 10~300 bp |
主要应用
DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) :小片段DNA/寡核苷酸高分辨率分离(核心应用)
RNA PAGE:小RNA、miRNA分析
Tricine-SDS-PAGE:小分子量蛋白(<10 kDa)分离