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50×Denhardt's 溶液（500 mL）
50×Denhardt's 溶液（500 mL）
基本属性
| 属性 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 50×Denhardt's 溶液 |
| 规格 | 500 mL |
| 组分 | 1% Ficoll 400 + 1% PVP-40 + 1% BSA |
| 保存条件 | -20 ℃分装保存（不可高压灭菌） |
| 灭菌方式 | 0.45 μm 滤器过滤除菌 |
| 主要用途 | Southern/Northern Blot预杂交/杂交液封闭剂 |
配方组成（500 mL体系）
| 组分 | 用量 | 终浓度（50×） | CAS号 |
|---|---|---|---|
| Ficoll 400 | 5 g | 1%（W/V） | 26873-85-8 |
| PVP-40（聚乙烯吡咯烷酮） | 5 g | 1%（W/V） | 9003-39-8 |
| BSA（牛血清白蛋白） | 5 g | 1%（W/V） | 9048-46-8 |
| 去离子水（无核酸酶） | 定容至500 mL | — | — |
配制步骤
称取5 g Ficoll 400、5 g PVP-40、5 g BSA，置于500 mL烧杯中。
加入约400 mL无核酸酶去离子水，充分搅拌至完全溶解（BSA溶解较慢，需温和搅拌）。
用无核酸酶去离子水定容至500 mL，充分混匀。
使用0.45 μm滤器过滤除菌。
分装成每份25 mL（或单次实验用量）。
-20 ℃避光保存。
关键注意事项
严禁高压灭菌：BSA为热敏感蛋白，高压灭菌会导致蛋白变性沉淀，溶液失效。
过滤除菌：必须使用0.45 μm滤器过滤除菌。
无核酸酶要求：配制用水和容器必须无核酸酶（RNase/DNase-free），否则会降解探针或核酸样本。
分装保存：BSA易滋生细菌，且反复冻融会影响封闭效果。建议小份分装（如25 mL/份），取用一份即用即弃。
变质判断：若溶液变浑浊或有絮状沉淀，说明已污染或蛋白变性，应废弃，不可使用。
在杂交液中的使用（100 mL杂交液配方）
| 50×Denhardt's用量 | 最终工作浓度 | 应用 |
|---|---|---|
| 10 mL | 5× | DNA杂交预杂交/杂交液 |
| 10 mL | 5× | RNA杂交预杂交/杂交液 |
主要应用
Southern/Northern Blot预杂交液与杂交液：作为封闭剂组分，与SSC、SDS等配合使用
膜杂交封闭：封闭硝酸纤维素膜/尼龙膜上的非特异性蛋白结合位点
Dot/Slot Blot：封闭液基础组分
