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20×SSPE 缓冲液（1 L，pH 7.4）
20×SSPE 缓冲液（1 L，pH 7.4）
基本属性
| 属性 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 20×SSPE 缓冲液（Saline-Sodium Phosphate-EDTA Buffer） |
| 规格 | 1 L |
| pH（室温） | 7.4 |
| 保存条件 | 室温密封保存（灭菌后） |
| 主要用途 | 核酸杂交（Southern/Northern Blot）缓冲液储备液，SSC替代品 |
配方组成（1 L体系）
| 组分 | 用量 | 终浓度 | CAS号 |
|---|---|---|---|
| NaCl（氯化钠） | 175.3 g | 3.0 M | 7647-14-5 |
| NaH₂PO₄·H₂O（磷酸二氢钠一水合物） | 27.6 g | 0.2 M | 13472-35-0 |
| Na₂EDTA·2H₂O（乙二胺四乙酸二钠二水合物） | 7.4 g | 0.02 M（20 mM） | 6381-92-6 |
| 10N NaOH | 约6.5 mL | 调pH至7.4 | 1310-73-2 |
| 去离子水 | 定容至1 L | — | — |
配制步骤
称取175.3 g NaCl、27.6 g NaH₂PO₄·H₂O、7.4 g Na₂EDTA·2H₂O，置于1 L烧杯中。
加入约800 mL去离子水，充分搅拌至完全溶解。
滴加10N NaOH调节pH至7.4（约需6.5 mL）。
用去离子水定容至1 L，充分混匀。
高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min）。
室温密封保存。
关键注意事项
磷酸盐特性：SSPE含磷酸盐，磷酸盐有助于保护核酸（螯合金属离子、抑制核酸酶），但在某些需要避免磷酸盐的实验中不能使用（如涉及钼酸铵的显色反应，磷酸盐会干扰显色）。
低温结晶处理：低温下若出现沉淀（盐析出），37 ℃水浴加热溶解即可，不影响性能。
pH调节：使用10N NaOH调节pH至7.4，建议使用pH计精确测定。
灭菌要求：推荐高温高压灭菌，避免微生物污染。
SSPE vs SSC 对比
| 比较项 | SSPE（本方案） | SSC |
|---|---|---|
| 缓冲体系 | 磷酸盐缓冲 | 柠檬酸盐缓冲 |
| 缓冲能力 | 更强 | 适中 |
| 核酸酶抑制 | 更优（磷酸盐+EDTA双重作用） | 一般（柠檬酸盐螯合） |
| 适用场景 | 高严谨性杂交、长时杂交 | 常规杂交 |
| 显色反应兼容性 | ❌ 干扰钼酸铵显色 | ✅ 兼容 |
💡 推荐：对于高严谨性杂交或样品中核酸酶含量较高的实验，推荐使用SSPE替代SSC。
稀释使用指南——常见工作浓度
| 工作浓度 | 20×SSPE用量 | 去离子水用量 | 典型应用 |
|---|---|---|---|
| 1×SSPE | 50 mL | 950 mL | 杂交后洗膜 |
| 5×SSPE | 250 mL | 750 mL | 预杂交/杂交液 |
主要应用
Northern Blot：RNA杂交，磷酸盐缓冲能力强，抑制RNase
Southern Blot：高严谨性DNA杂交
高严谨性核酸杂交：需要更强缓冲能力和核酸酶抑制的实验
