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DNA杂交预杂交液/杂交液（100 mL）
DNA杂交预杂交液/杂交液（100 mL）
基本属性
| 属性 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | DNA杂交预杂交液/杂交液（Hybridization Buffer / Prehybridization Buffer） |
| 规格 | 100 mL |
| 主要用途 | Southern/Northern Blot预杂交与杂交孵育 |
| 保存条件 | -20 ℃长期保存，4 ℃短期保存（避免SDS析出） |
| 使用前处理 | 鲑鱼精DNA须预先变性并剪切 |
配方组成（100 mL体系）
| 组分 | 使用来源 | 用量 | 工作浓度 | CAS号（如适用） |
|---|---|---|---|---|
| 20×SSC（或20×SSPE） | 储备液 | 30 mL | 6× | — |
| 50×Denhardt‘s | 储备液 | 10 mL | 5× | — |
| 10% SDS | 储备液 | 5 mL | 0.5%（W/V） | 25155-30-0 |
| 10 mg/mL Salmon DNA | 储备液 | 1 mL | 100 μg/mL | 438545-06-3 |
| dH₂O（去离子水） | — | 54 mL | — | — |
配制步骤
按上表用量，依次量取30 mL 20×SSC（或SSPE） 、10 mL 50×Denhardt‘s 、5 mL 10% SDS 、1 mL 10 mg/mL Salmon DNA，加入200 mL烧杯中。
加入54 mL dH₂O，充分混匀。
使用0.45 μm滤器过滤除去不溶性杂质。
分装后于-20 ℃避光保存。
关键注意事项
鲑鱼精DNA前处理：使用前必须将Salmon DNA煮沸变性10分钟并迅速冰浴冷却，使其成为单链短片段，方可有效封闭膜上的非特异性位点。未变性的鲑鱼精DNA不具备封闭能力。
两种缓冲体系可选：SSC（柠檬酸钠/氯化钠）和SSPE（磷酸盐/氯化钠/EDTA）均可用于杂交实验。SSPE缓冲能力更强，适用于高严谨性杂交；SSC为经典选择，适用性更广。
过滤要求：使用0.45 μm滤器过滤，去除SDS在低温下可能析出的结晶及Denhardt’s溶液中不溶物。
SDS低温析出：SDS在低温下可能析出结晶。若配制后出现沉淀，可37 ℃水浴加热溶解后使用。
预杂交与杂交通用：本配方可同时用于预杂交（不含探针）和杂交（含标记探针）步骤。预杂交时使用不含探针的溶液封闭膜；杂交时取同体积溶液加入变性的标记探针后使用。
不可高压灭菌：Denhardt‘s溶液和鲑鱼精DNA中的蛋白/核酸组分受热易变性，严禁高温高压灭菌。
Southern/Northern Blot杂交流程中的位置
| 步骤 | 溶液 | 说明 |
|---|---|---|
| 预杂交 | 本溶液（不含探针） | 封闭膜上非特异性DNA结合位点 |
| 杂交 | 本溶液（含变性标记探针） | 探针与靶核酸特异性结合 |
