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DNA杂交预杂交液/杂交液（1 L）——凝胶前处理用变性液
DNA杂交预杂交液/杂交液（1 L）——凝胶前处理用变性液
基本属性
| 属性 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | DNA杂交前处理变性液（用于Southern Blot凝胶变性） |
| 规格 | 1 L |
| 主要成分 | 1.5 M NaCl + 0.5 M NaOH |
| pH | >13（新鲜配制） |
| 保存条件 | 室温密封保存（建议现配现用） |
| 核心应用 | Southern Blot中凝胶DNA变性处理，为杂交做准备 |
配方组成（1 L体系）
| 组分 | 用量 | 终浓度 | CAS号 |
|---|---|---|---|
| NaCl（氯化钠） | 87.7 g | 1.5 M | 7647-14-5 |
| NaOH（氢氧化钠） | 20 g | 0.5 M | 1310-73-2 |
| 去离子水 | 定容至1 L | — | — |
配制步骤
称取87.7 g NaCl和20 g NaOH，置于1 L烧杯中（推荐使用塑料烧杯）。
加入约800 mL去离子水，充分搅拌至完全溶解（NaOH溶解为放热反应，溶液升温属正常）。
待溶液完全冷却至室温后，用去离子水定容至1 L，充分混匀。
室温密封保存，建议现配现用。
⚠️ 重要说明
本配方（1.5 M NaCl + 0.5 M NaOH）在Southern Blot实验流程中用于杂交前凝胶DNA变性处理，而非杂交孵育步骤中使用的杂交液/预杂交液。
Southern Blot完整流程中的位置：
电泳 → 凝胶DNA变性（本溶液） → 中和 → 转膜 → 预杂交（使用标准杂交液） → 杂交（使用含探针的杂交液） → 洗膜 → 检测
本溶液的作用是将凝胶中的双链DNA变性为单链DNA，使其能够与后续的标记探针进行杂交。标准杂交液/预杂交液应包含SSC、Denhardt‘s溶液、SDS、鲑鱼精DNA等组分，如需配制标准杂交液请另行提供配方。
关键注意事项
安全防护：NaOH具有强腐蚀性，配制时必须佩戴耐化学品手套和护目镜。若不慎溅入眼睛或皮肤，立即用大量清水冲洗至少15分钟并就医。
现配现用：NaOH会持续吸收空气中的CO₂，导致pH下降、变性效率降低。强烈建议实验当天新鲜配制。
放热反应：NaOH溶解剧烈放热，应缓慢加入并持续搅拌；使用塑料烧杯防止玻璃炸裂。
冷却后定容：待溶液完全冷却至室温后再定容，避免热膨胀导致浓度偏差。
在Southern Blot中的使用方式
| 步骤 | 操作 | 时间 |
|---|---|---|
| 1 | 电泳结束后，将凝胶切去多余部分 | — |
| 2 | 将凝胶浸泡于足量本变性液中（完全浸没） | — |
| 3 | 室温摇床缓慢摇动 | 15～30分钟 |
| 4 | 更换新鲜变性液，继续摇动 | 15分钟 |
| 5 | 倒去变性液，去离子水漂洗 | 简短 |
| 6 | 转入中和缓冲液进行中和 | 2 × 15分钟 |
