Salmon DNA 溶液（10 mg/mL）（约100 mL）

基本属性

配方组成

配制流程概览

1. 溶解：2 g鲑鱼精DNA + 200 mL TE Buffer，室温搅拌2～4小时

2. 调整盐浓度：加4 mL 5M NaCl（终浓度0.1 M）

3. 抽提纯化：苯酚抽提1次 → 苯酚/氯仿抽提1次

4. 剪切：17号针头快速吸打约20次

5. 沉淀：2倍体积预冷乙醇沉淀

6. 回收定容：离心回收DNA，溶于100 mL去离子水

7. 定量稀释：测定OD₂₆₀，稀释至10 mg/mL

8. 变性分装：煮沸10分钟，分装1 mL/份，-20 ℃保存

关键注意事项

• 反复冻融：长期反复冻融会导致DNA断裂或降解，建议小份分装（1 mL/份），避免重复冻融。

• 溶解浑浊处理：若溶解过程中溶液始终浑浊，可能含有杂质或未完全溶解，应延长搅拌时间或适当加热（<60 ℃） 辅助溶解，最后务必过滤。

• 使用前处理：每管使用前需在沸水浴中加热5分钟，然后迅速冰浴冷却，使DNA充分变性为单链。

• 针头剪切：使用17号皮下注射针头快速吸打约20次，将高分子量DNA剪切为均匀的短片段，便于后续实验应用。

主要应用

• 原位杂交（ISH） ：作为封闭剂（Blocking Reagent） 使用，降低背景信号。

• Southern/Northern Blot：预杂交液中作为非特异性竞争DNA，封闭膜上的非特异性结合位点。

• 核酸杂交实验：减少探针与载体材料的非特异性吸附。

• 微阵列实验：封闭非特异性结合位点，提高信噪比。