溴化乙锭溶液配制指南（10 mg/mL，100 mL）

概述

溴化乙锭（Ethidium Bromide，简称EB）是一种经典的核酸荧光染色剂，能够嵌入DNA/RNA的碱基对之间，在紫外光激发下发出橙红色荧光，是琼脂糖凝胶电泳中检测核酸条带的最常用染料。EB灵敏度高、操作简便，但由于其具有强致癌性和致突变性，配制和使用全过程必须严格执行安全操作规范。

本品为100 mL规格的10 mg/mL EB浓缩储备液，使用时稀释至0.5 μg/mL工作浓度进行凝胶染色。EB对光敏感，配制后须严格避光保存。

所需材料

安全操作规范

⚠️ 溴化乙锭是一种强致癌物质，操作前请务必阅读以下安全规范：

详细配制流程

第一步：准备工作
开启通风橱，确认通风正常。穿戴好双层手套、护目镜、实验服。将所有操作区域铺上吸水垫或一次性防护垫。

第二步：称量与溶解
在通风橱内，精确称取1 g 溴化乙锭粉末，转移至100 mL容器中（推荐使用带盖的棕色玻璃瓶或可避光容器）。加入约80 mL去离子水，放入磁力搅拌子，在通风橱内低速搅拌数小时，直至EB粉末完全溶解（溶液呈深红色至橙红色，无可见颗粒）。

第三步：定容
用去离子水定容至100 mL，继续搅拌至均匀。

第四步：避光保存
确保使用棕色瓶保存，若使用透明容器，必须用铝箔纸紧密包裹。瓶身应明确标注“EB溶液 10 mg/mL ⚠️致癌物”及配制日期，并贴有生物危害警示标识。

第五步：清洁
操作完毕后，彻底清洁操作台面。所有接触过EB的耗材（枪头、称量纸、手套等）须放入专门的EB废弃物收集容器中。

使用指南——工作浓度与添加方法

EB储备液浓度为10 mg/mL，使用时稀释至0.5 μg/mL工作浓度：

方法一：凝胶预染（推荐）

在琼脂糖凝胶熔化并冷却至约60 ℃后，加入上述用量的EB储备液，充分混匀后倒胶。

方法二：凝胶后染

电泳结束后，将凝胶浸泡于含0.5 μg/mL EB的染色液中（通常1×TAE或TBE缓冲液配制），避光染色15～30分钟，然后用去离子水脱色5～10分钟。

⚠️ 安全提示：后染法产生的废液体积大，EB污染物量多，处理成本较高。推荐使用预染法以最大限度减少EB污染物的产生。

EB染色原理

溴化乙锭分子结构中含有三环平面结构，可嵌入DNA双螺旋的碱基对之间。嵌入后，EB分子在紫外光（254 nm或302 nm）激发下，发射出橙红色荧光（590 nm） ，荧光强度与DNA含量成正比（可检测低至1～5 ng的DNA）。RNA因多为单链，EB嵌入效率较低，染色灵敏度约为DNA的十分之一。

EB对环境的影响

溴化乙锭残留在环境中具有遗传毒性，不可直接排入下水道。废弃物处理要点：

• EB废液：收集于专用废液桶，交由专业危废处理机构处置。

• 接触EB的耗材：移液枪头、离心管、手套等放入专用收集袋/箱中，密封标识后处理。

• 严禁直接倾倒：无论稀释与否，EB溶液均不可直接倒入水槽或垃圾桶。

常见问题与解决方案

安全的替代染料（可选）

若实验室希望避免使用致癌性EB，可选用以下替代产品：

💡 建议：若无特殊要求，推荐逐步替换为GelRed或SYBR Safe等更安全的替代染料。

关键操作要点

1. 安全第一，操作全程在通风橱内进行：EB粉末在称量和溶解过程中可能产生气溶胶，必须全程在通风橱中操作。

2. 双层手套是标准配置：操作EB时推荐佩戴双层丁腈手套，外层手套可定期更换，防止交叉污染。

3. 标记清晰，警示明显：所有含EB的容器、废液桶须明确标注“EB ⚠️致癌物”字样。

4. 严格避光保存：光分解是EB储备液变质的主要因素，必须使用棕色瓶或铝箔包裹。

5. 避免误用蒸馏水代替去离子水：自来水中可能含杂质，影响EB的荧光性能，推荐使用去离子水或超纯水。

应用场景