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RNase A溶液是分子生物学实验中去除RNA污染的常用工具酶,广泛应用于质粒DNA提取和基因组DNA纯化。该酶来源于牛胰腺,分子量约13.7kDa,能够特异性切割RNA链上嘧啶残基(胞嘧啶C和尿嘧啶U)的3'端磷酸二酯键。其活性受盐浓度调节:低盐条件(0-100mM NaCl)下可切割单链RNA、双链RNA及RNA-DNA杂交链中的RNA;高盐条件(≥0.3M)下仅特异性切割单链RNA。
在质粒提取实验中,RNase A通常在裂解步骤前加入溶液I(悬浮液)中,终浓度100μg/mL,37℃孵育10分钟即可有效去除RNA。若提取后DNA样本仍有RNA残留,也可将RNase A直接加入DNA溶液中,终浓度10-100μg/mL,37℃孵育10-30分钟。RNase A在SDS等变性剂存在下会失活,因此需在裂解步骤前或SDS去除后使用——若在加入裂解液(溶液II)之后才添加RNase A,酶活性已被SDS抑制,无法发挥作用。若后续实验对RNase A残留敏感(如蛋白表达或某些RNA相关分析),可通过蛋白酶K处理(55℃、15-30分钟)或苯酚-氯仿抽提去除。
市售RNase A常见规格为10mg/mL溶液,保存在含50%甘油的缓冲液中(10mM Tris-HCl、1mM EDTA,pH7.5),可在-20℃长期保存,经特殊处理不含DNase和蛋白酶,使用前无需加热灭活。甘油的存在使溶液在-20℃下保持液态,方便直接取用。分装保存可避免反复冻融导致的酶活性下降。
杭州富沃克生物科技有限公司提供高纯度RNase A溶液产品,适用于基因组DNA纯化与核酸分析实验。
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