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DNA溶在水里不放心？这份TE缓冲液配方请收好
一、TE缓冲液是什么？
TE缓冲液（Tris-EDTA buffer）是分子生物学中最基础的DNA保护液——它提供pH缓冲和核酸酶抑制两大核心保护功能。“TE”这个名字来源于它的两大核心组分：Tris（pH缓冲剂）和EDTA（金属离子螯合剂）。它的核心作用就一句话：溶解DNA/RNA，同时保护其不被降解。
Tris提供弱碱性环境（pH 8.0），维持DNA的结构稳定
EDTA则像“清道夫”一样螯合掉溶液中的Mg²⁺等二价金属离子——这些离子正是核酸酶发挥活性必需的“燃料”，被EDTA“没收”后核酸酶就失去了活性
标准1×TE缓冲液组成为：10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 8.0。这个配方常被称为T10E1缓冲液，读作“T十E一”。
二、配方成分
下表整理了TE缓冲液的配方成分及作用【1】：
| 组分 | 终浓度 | 核心作用 | 配制用量（以1L计） |
|---|---|---|---|
| 1 M Tris-HCl（pH 8.0） | 10 mM | 维持弱碱性pH环境，稳定DNA结构 | 10 mL |
| 0.5 M EDTA（pH 8.0） | 1 mM | 螯合Mg²⁺等金属离子，抑制核酸酶活性 | 2 mL |
| ddH₂O/去离子水 | — | 溶剂，定容至目标体积 | 补足至1 L |
三、配制步骤
准备工作：先配制两种母液——1 M Tris-HCl（pH 8.0）和0.5 M EDTA（pH 8.0）。
1. 1 M Tris-HCl（pH 8.0）配制（100 mL） ：说明：Tris碱（游离碱形式）加HCl调节pH后即转变为Tris-HCl（盐酸盐形式）。以下步骤即用Tris碱配制1M Tris-HCl缓冲液。
在通风橱内，称取12.11 g Tris碱，溶于约80 mL纯化水中，冷却至室温。用浓HCl（约12 M）逐滴加入，边加边搅拌，用pH计监测至pH 8.0（实际用量因Tris碱批次和温度而异，通常在5-7 mL范围，以pH计读数为准），定容至100 mL。
关键提醒：Tris-HCl缓冲液的pH值随温度变化——温度每升高1℃，pH约降低0.03个单位。调pH时务必在目标使用温度下校准。
2. 0.5 M EDTA（pH 8.0）配制（100 mL） ：
称取18.61 g EDTA-Na₂·2H₂O（分子量372.24），溶于约80 mL纯化水中。注意：EDTA二钠盐在pH接近8.0时才完全溶解，需用10 M NaOH溶液逐滴加入（约需1.7-2.2 g NaOH pellets），边加边剧烈搅拌，直至pH达到8.0（溶液澄清透明）。完全溶解后定容至100 mL。
1×TE缓冲液配制（以1 L为例） ：
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| ① | 量取10 mL 1 M Tris-HCl（pH 8.0），加入约800 mL纯化水中 |
| ② | 量取2 mL 0.5 M EDTA（pH 8.0），加入上述溶液中 |
| ③ | 充分混匀后用纯化水定容至1 L |
| ④ | 建议高温高压灭菌（121℃，15-20分钟） 以彻底灭活核酸酶。如使用无菌试剂和无菌水在无菌条件下操作，也可不灭菌。灭菌后待冷却至室温，建议用pH计重新校核pH |
| ⑤ | 分装后保存。室温保存6-12个月，4℃保存12-24个月。建议按单次实验用量（如10 mL、50 mL）分装至无菌离心管或试剂瓶中，避免反复从储存瓶中取用引入污染 |
四、🔑 关键提醒
| 关键点 | 说明 |
|---|---|
| EDTA溶解条件 | EDTA必须调pH至8.0才会完全溶解，否则粉末一直悬在那里就是不化 |
| 母液pH一致性 | Tris-HCl和EDTA的母液都必须是pH 8.0，否则混合后终浓度pH会偏离目标 |
| 灭菌后复测pH | 建议高温高压灭菌以彻底灭活核酸酶，但灭菌后需冷却至室温重新校准pH |
| 保存温度 | 短期使用的DNA可4℃保存，长期保存建议-20℃或-80℃ |
| 避免反复冻融 | 反复冻融产生的冰晶会物理损伤DNA |
| EDTA对酶反应的干扰 | TE中的EDTA会螯合Mg²⁺，直接用于酶切/PCR等需要二价金属离子的反应前务必注意——需将EDTA浓度稀释至≤0.1 mM后再进行酶切，或透析去除EDTA |
五、常见问题自查
| 问题 | 原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| EDTA怎么都溶不掉 | pH不够高，EDTA在中性/酸性条件下不溶 | 继续加10M NaOH调pH至8.0，边加边搅拌直至溶液澄清 |
| 灭菌后pH变了 | Tris的pH随温度变化 | 冷却至室温后重新校准pH至8.0 |
| DNA在TE中还是降解了 | ①核酸酶污染 ②反复冻融 | ①确保灭菌彻底，使用无核酸酶耗材 ②分装保存，避免反复冻融 |
| 酶切反应效率低 | TE中EDTA螯合了Mg²⁺ | 将DNA稀释至EDTA浓度≤0.1 mM后再进行酶切，或透析去除EDTA |
六、省心之选：直接买现成的
自己配制TE缓冲液虽然步骤清晰，但母液配制、pH精确调节（需注意温度影响）、灭菌后复测pH——每一步都可能引入误差。
如果追求省心省力、批次稳定，可以直接选择杭州富沃克生物科技有限公司的即用型TE缓冲液：
📦 产品信息：
| 产品名称 | 规格 | 产品货号 |
|---|---|---|
| TE缓冲液 | 10 mL / 100 mL | TEH606-01 |
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参考文献
[1] Sambrook J, Russell DW. Molecular Cloning: A Laboratory Manual[M]. 3rd ed. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001.
[2] TE缓冲液[EB/OL]. 维基百科, 2013-09-25.
[3] TE缓冲液[EB/OL]. 百度百科, 2026-02-07.
[4] TE缓冲液配制及作用[EB/OL]. Thermo Fisher Scientific.
[5] 0.5M EDTA (pH 8.0)配制方法[EB/OL]. 生物在线.
[6] TE Buffer (pH 8.0)配方[EB/OL]. NCSU Lab.
