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新鲜组织RNA保存液：从配方到使用，让RNA不再“即取即降解”
一、RNA保存液是什么？
新鲜组织RNA保存液是一种水相、无毒的组织储存液体，核心功能就四个字：抑、渗、稳、护——抑制RNase活性、渗入组织细胞内部、稳定RNA分子结构、保护核酸不被降解【2】【3】。
将新鲜组织切块后直接浸入保存液中，试剂会迅速渗透到组织内部，原位“定格”细胞内的RNA状态。整个过程从“取样→液氮速冻→-80℃转运”简化为“取样→浸泡保存液→任意温度运输”，再也不用追着液氮罐跑了。
二、核心配方与成分解析
市面上RNA保存液的配方虽有差异，但核心功能模块基本一致【2】【3】：
| 成分类别 | 常见原料 | 核心作用 | 参考浓度 |
|---|---|---|---|
| 离液盐/蛋白变性剂 | 硫酸铵 | 高浓度盐破坏蛋白水化层，使RNase变性失活 | 400-500 g/L（约3.0-3.8 M） |
| 螯合剂 | EDTA（乙二胺四乙酸） | 螯合Mg²⁺、Zn²⁺等金属离子——这些金属离子可催化RNA的水解反应，去除后提高RNA稳定性【2】 | 15-25 mM |
| 缓冲/保护剂 | 柠檬酸钠 | 维持酸性pH环境（pKa≈4.76/5.40，在pH5.2附近缓冲能力良好，RNase在酸性条件下活性极低），同时柠檬酸根可辅助螯合金属离子 | 15-25 mM |
| 还原剂（可选） | DTT（二硫苏糖醇） | 打断蛋白二硫键，辅助RNase彻底失活 | 10-20 mM |
| 溶剂 | 无酶无菌水 | 作为载体，保证各组分均匀分散 | 余量 |
配比仅供参考，不同配方体系间存在差异。另有异硫氰酸胍体系（如4-5 M）为强烈变性路线，更适用于RNA提取裂解液，但该体系在酸性条件下易析出沉淀，不适用于本配方的保存场景
注：RNase A本身不依赖金属离子辅因子，EDTA并非直接抑制RNase A活性。EDTA在本配方中的作用是通过螯合金属离子来防止金属离子催化的RNA水解反应【2】。
三、配制步骤（以硫酸铵-柠檬酸钠体系为例，1 L）【2】
所需原料：
| 原料 | 用量 | 终浓度 |
|---|---|---|
| EDTA二钠盐（Na₂EDTA·2H₂O） | 约7.4 g | 20 mM |
| 柠檬酸三钠二水合物 | 约7.4 g | 25 mM |
| 硫酸铵 | 400-500 g | 约3.0-3.8 M |
| 无酶无菌水 | 定容至1 L | — |
| 1 M柠檬酸溶液 | 用于调节pH | — |
配制步骤：
| 步骤 | 操作 | 关键说明 |
|---|---|---|
| ① 配EDTA溶液 | 称取约7.4 g EDTA二钠盐，溶于200 mL无酶水中，使用10 M NaOH逐滴加入（约需2-4 mL，以pH计监测为准），调节pH至8.0帮助溶解 | EDTA在碱性条件下更易溶 |
| ② 配柠檬酸钠溶液 | 称取约7.4 g柠檬酸三钠二水合物，溶于50 mL无酶水中，搅拌至完全溶解 | — |
| ③ 混合主成分 | 将上述两种溶液混合，加入400-500 g硫酸铵粉末 | 高浓度盐溶液，需耐心搅拌 |
| ④ 促溶 | 磁力搅拌器室温搅拌8-16小时（过夜） 至硫酸铵完全溶解 | 若室温较低，可适当延长搅拌时间；若需加速，可低加热至不超过37℃，但溶解后必须完全冷却至室温后再进行下一步 |
| ⑤ 定容与调pH | 加无酶无菌水定容至1 L。冷却至室温后，用1 M柠檬酸溶液缓慢调节pH至5.2 | 柠檬酸为弱酸，滴定曲线平缓不易过调，且柠檬酸根本身具有螯合辅助作用。EDTA终浓度较低（20 mM），且柠檬酸钠可辅助螯合，调节至pH5.2后不会析出 |
| ⑥ 过滤除菌与分装 | 用0.45 μm或0.22 μm滤膜过滤除菌（建议PES或PVDF材质），在超净工作台内分装至无菌离心管中 | 避免二次污染 |
保存：室温或4℃保存，可稳定保存6个月以上【2】。
四、🔑 关键提醒
| 关键点 | 说明 |
|---|---|
| 硫酸铵完全溶解是关键 | 400-500 g/L在常温下仍属高浓度，需要耐心搅拌（室温下过夜搅拌通常可完全溶解） |
| 无RNase环境 | 所有器具和溶剂必须无核酸酶（使用DEPC处理水或商品化无酶水） |
| pH必须精确 | pH必须精确控制在5.2左右——pH过高RNase抑制效果大打折扣，pH过低可能损伤组织 |
| 洁净操作 | 配制全程在洁净区操作，避免外源RNase污染 |
| 组织浸泡要求 | 组织需切成0.5-1 cm³的小块，保存液用量至少为组织体积的8-10倍 |
| 安全防护 | 称量硫酸铵时佩戴口罩以防粉尘吸入，佩戴护目镜和耐酸碱手套 |
五、省心之选：直接买现成的
自己配制虽然配方清晰，但原料采购（尤其是高品质硫酸铵和EDTA）、无RNase环境控制、pH精确调节和批次稳定性都是不小的门槛【2】【3】。
如果追求省心省力，可以直接选择杭州富沃克生物科技有限公司的即用型新鲜组织RNA保存剂。产品采用专业缓冲防护配方，可强效抑制核酸酶活性，有效延缓RNA降解，稳固维持核酸完整结构。能迅速渗透新鲜组织细胞内部，在非冻状态下原位稳定和保护细胞内的RNA。参考文献[1]报道，经类似配方保存液保护的RNA在室温可保存7天，4℃可保存4周，-20℃或-80℃可长期保存（具体保存时间因样本类型而异）。适配动物组织（肝、脑、心、肾、肌肉等）、培养细胞、细菌、真菌等多种样本类型。喷雾/浸泡双模式设计，操作简单。
📦 产品信息：
| 产品名称 | 规格 | 产品货号 |
|---|---|---|
| 新鲜组织RNA保存剂 | 1 mL / 50 mL | ZZB606-01 |
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🔗 官网链接：科研非冻型组织RNA保存液 常温长效RNA稳定保存试剂-杭州富沃克生物科技有限公司
参考文献
[1] Camacho-Sanchez M, Burraco P, Gomez-Mestre I, et al. Preservation of RNA and DNA from mammal samples under field conditions[J]. Molecular Ecology Resources, 2013, 13:663-673.
[2] 温州医科大学附属第一医院. 一种动物组织RNA的样品保存液及其保存方法: CN109609498A[P]. 2019-04-12.
[3] 中国医科大学（吕昌龙, 翟景波, 高植鹏, 王大南, 姜雪峰）. 一种生物组织RNA保护试剂及其制备方法和应用: CN104673717A[P]. 2015-06-03.
