SDS-PAGE 浓缩胶与分离胶配制方案
发布：2026-07-16 浏览：0次
SDS-PAGE 浓缩胶与分离胶配制方案
产品概述
SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是蛋白质分析中最核心的电泳技术。本方案基于Laemmli不连续缓冲体系，包含浓缩胶（pH 6.8）和分离胶（pH 8.8）双层结构，配合SDS使蛋白质按分子量大小实现高分辨率分离。浓缩胶使蛋白质样品在进入分离胶前压缩成薄层，分离胶则根据分子筛效应实现精确分离。
浓缩胶配方（5%）
适用场景：所有SDS-PAGE通用浓缩胶，推荐高度1～2 cm
| 组分 | 1 mL | 2 mL | 3 mL | 4 mL | 5 mL | 6 mL | 8 mL | 10 mL |
|---|
| 超纯水 | 0.68 mL | 1.40 mL | 2.10 mL | 2.70 mL | 3.40 mL | 4.10 mL | 5.50 mL | 6.80 mL |
| 30% Acrylamide | 0.17 mL | 0.33 mL | 0.50 mL | 0.67 mL | 0.83 mL | 1.00 mL | 1.30 mL | 1.70 mL |
| 1.0 M Tris-HCl（pH 6.8） | 0.13 mL | 0.25 mL | 0.38 mL | 0.50 mL | 0.63 mL | 0.75 mL | 1.00 mL | 1.25 mL |
| 10% SDS | 10 μL | 20 μL | 30 μL | 40 μL | 50 μL | 60 μL | 80 μL | 100 μL |
| 10% APS | 10 μL | 20 μL | 30 μL | 40 μL | 50 μL | 60 μL | 80 μL | 100 μL |
| TEMED | 1 μL | 2 μL | 3 μL | 4 μL | 5 μL | 6 μL | 8 μL | 10 μL |
分离胶配方（6%–15%）
适用蛋白范围：6%（50～200 kDa）→ 8%（30～150 kDa）→ 10%（20～120 kDa）→ 12%（10～60 kDa）→ 15%（5～40 kDa）
6% 分离胶
| 组分 | 5 mL | 10 mL | 15 mL | 20 mL | 25 mL | 30 mL | 40 mL | 50 mL |
|---|
| 超纯水 | 2.6 mL | 5.3 mL | 7.9 mL | 10.6 mL | 13.2 mL | 15.9 mL | 21.2 mL | 26.5 mL |
| 30% Acrylamide | 1.0 mL | 2.0 mL | 3.0 mL | 4.0 mL | 5.0 mL | 6.0 mL | 8.0 mL | 10.0 mL |
| 1.5 M Tris-HCl（pH 8.8） | 1.3 mL | 2.5 mL | 3.8 mL | 5.0 mL | 6.3 mL | 7.5 mL | 10.0 mL | 12.5 mL |
| 10% SDS | 50 μL | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 250 μL | 300 μL | 400 μL | 500 μL |
| 10% APS | 50 μL | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 250 μL | 300 μL | 400 μL | 500 μL |
| TEMED | 4 μL | 8 μL | 12 μL | 16 μL | 20 μL | 24 μL | 32 μL | 40 μL |
8% 分离胶
| 组分 | 5 mL | 10 mL | 15 mL | 20 mL | 25 mL | 30 mL | 40 mL | 50 mL |
|---|
| 超纯水 | 2.3 mL | 4.6 mL | 6.9 mL | 9.3 mL | 11.6 mL | 13.9 mL | 18.5 mL | 23.2 mL |
| 30% Acrylamide | 1.3 mL | 2.7 mL | 4.0 mL | 5.3 mL | 6.7 mL | 8.0 mL | 10.7 mL | 13.3 mL |
| 1.5 M Tris-HCl（pH 8.8） | 1.3 mL | 2.5 mL | 3.8 mL | 5.0 mL | 6.3 mL | 7.5 mL | 10.0 mL | 12.5 mL |
| 10% SDS | 50 μL | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 250 μL | 300 μL | 400 μL | 500 μL |
| 10% APS | 50 μL | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 250 μL | 300 μL | 400 μL | 500 μL |
| TEMED | 3 μL | 6 μL | 9 μL | 12 μL | 15 μL | 18 μL | 24 μL | 30 μL |
10% 分离胶
| 组分 | 5 mL | 10 mL | 15 mL | 20 mL | 25 mL | 30 mL | 40 mL | 50 mL |
|---|
| 超纯水 | 1.9 mL | 3.9 mL | 5.9 mL | 7.9 mL | 9.9 mL | 11.9 mL | 15.8 mL | 19.7 mL |
| 30% Acrylamide | 1.7 mL | 3.3 mL | 5.0 mL | 6.7 mL | 8.3 mL | 10.0 mL | 13.3 mL | 16.7 mL |
| 1.5 M Tris-HCl（pH 8.8） | 1.3 mL | 2.5 mL | 3.8 mL | 5.0 mL | 6.3 mL | 7.5 mL | 10.0 mL | 12.5 mL |
| 10% SDS | 50 μL | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 250 μL | 300 μL | 400 μL | 500 μL |
| 10% APS | 50 μL | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 250 μL | 300 μL | 400 μL | 500 μL |
| TEMED | 2 μL | 4 μL | 6 μL | 8 μL | 10 μL | 12 μL | 16 μL | 20 μL |
12% 分离胶
| 组分 | 5 mL | 10 mL | 15 mL | 20 mL | 25 mL | 30 mL | 40 mL | 50 mL |
|---|
| 超纯水 | 1.6 mL | 3.3 mL | 4.9 mL | 6.6 mL | 8.2 mL | 9.9 mL | 13.2 mL | 16.5 mL |
| 30% Acrylamide | 2.0 mL | 4.0 mL | 6.0 mL | 8.0 mL | 10.0 mL | 12.0 mL | 16.0 mL | 20.0 mL |
| 1.5 M Tris-HCl（pH 8.8） | 1.3 mL | 2.5 mL | 3.8 mL | 5.0 mL | 6.3 mL | 7.5 mL | 10.0 mL | 12.5 mL |
| 10% SDS | 50 μL | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 250 μL | 300 μL | 400 μL | 500 μL |
| 10% APS | 50 μL | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 250 μL | 300 μL | 400 μL | 500 μL |
| TEMED | 2 μL | 4 μL | 6 μL | 8 μL | 10 μL | 12 μL | 16 μL | 20 μL |
15% 分离胶
| 组分 | 5 mL | 10 mL | 15 mL | 20 mL | 25 mL | 30 mL | 40 mL | 50 mL |
|---|
| 超纯水 | 1.1 mL | 2.3 mL | 3.4 mL | 4.6 mL | 5.7 mL | 6.9 mL | 9.2 mL | 11.5 mL |
| 30% Acrylamide | 2.5 mL | 5.0 mL | 7.5 mL | 10.0 mL | 12.5 mL | 15.0 mL | 20.0 mL | 25.0 mL |
| 1.5 M Tris-HCl（pH 8.8） | 1.3 mL | 2.5 mL | 3.8 mL | 5.0 mL | 6.3 mL | 7.5 mL | 10.0 mL | 12.5 mL |
| 10% SDS | 50 μL | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 250 μL | 300 μL | 400 μL | 500 μL |
| 10% APS | 50 μL | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 250 μL | 300 μL | 400 μL | 500 μL |
| TEMED | 2 μL | 4 μL | 6 μL | 8 μL | 10 μL | 12 μL | 16 μL | 20 μL |
组分功能一览
| 组分 | 核心功能 |
|---|
| 超纯水 | 无杂质溶剂，提供均一液相分散介质 |
| 30% Acrylamide储液 | 单体与交联剂，聚合后形成三维多孔网状结构，提供分子筛效应 |
| 1.0 M Tris-HCl（pH 6.8） | 浓缩胶缓冲体系，与分离胶pH梯度共同促成蛋白质浓缩效应 |
| 1.5 M Tris-HCl（pH 8.8） | 分离胶高pH缓冲体系，提供稳定电荷环境，确保准确分离 |
| 10% SDS | 阴离子去污剂，使蛋白质变性并结合负电荷，消除天然电荷与构象差异 |
| 10% APS | 自由基引发剂，触发丙烯酰胺的自由基聚合反应 |
| TEMED | 亲核性催化剂，加速APS自由基生成，调控凝胶聚合速度 |
分离胶浓度选择指南
| 凝胶浓度 | 最佳蛋白分离范围（kDa） | 推荐应用 |
|---|
| 6% | 50～200 | 高分子量蛋白（肌球蛋白、β-半乳糖苷酶） |
| 8% | 30～150 | 常规中高分子量蛋白 |
| 10% | 20～120 | 最常用浓度（多数实验室首选） |
| 12% | 10～60 | 中低分子量蛋白 |
| 15% | 5～40 | 小分子量多肽、低丰度蛋白 |
关键注意事项
| 要点 | 说明 |
|---|
| ⚠️ 神经毒性 | 丙烯酰胺为神经毒性物质，操作全程戴手套、口罩、护目镜 |
| ⚠️ APS现配现用 | 10% APS需现配现用（或4℃保存≤1周），失效会导致聚合失败 |
| ⚠️ TEMED保存 | TEMED易挥发，开封后密封4℃避光保存 |
| ⚠️ 温度调控 | 室温＜20℃时适当增加APS/TEMED用量；＞30℃时减少用量 |
| ⚠️ 灌胶顺序 | 先灌分离胶，凝固后再灌浓缩胶（需用去离子水或异丙醇压平 |
