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TB/Amp/X-Gal/IPTG 蓝白斑筛选平板（1 L）
TB/Amp/X-Gal/IPTG 蓝白斑筛选平板（1 L）
基本属性
| 属性 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | TB/Amp/X-Gal/IPTG 蓝白斑筛选平板 |
| 规格 | 1 L（约30～35块/90 mm培养皿） |
| 筛选标记 | Ampicillin（100 μg/mL） |
| 显色系统 | X-Gal（40 μg/mL）+ IPTG（24 μg/mL） |
| 保存条件 | 4 ℃避光倒置密封保存（尽快使用） |
| 主要用途 | 蓝白斑筛选 + 高密度培养（含Amp抗性及lacZα互补系统的重组克隆筛选） |
配方组成（1 L体系）
基础培养基
| 组分 | 用量 | 终浓度 | CAS号 |
|---|---|---|---|
| Tryptone（胰蛋白胨） | 12 g | 1.2%（W/V） | 91079-40-2 |
| Yeast Extract（酵母提取物） | 24 g | 2.4%（W/V） | 8013-01-2 |
| Glycerol（甘油） | 4 mL | 0.4%（V/V） | 56-81-5 |
| Agar（琼脂） | 15 g | 1.5%（W/V） | 9002-18-0 |
磷酸盐缓冲液（100 mL，单独配制灭菌）
| 组分 | 用量 | 终浓度（缓冲液中） | CAS号 |
|---|---|---|---|
| KH₂PO₄（磷酸二氢钾） | 2.31 g | 0.17 M | 7778-77-0 |
| K₂HPO₄（磷酸氢二钾） | 12.54 g | 0.72 M | 7758-11-4 |
添加剂（灭菌冷却后添加）
| 添加剂 | 储备液浓度 | 用量 | 终浓度 | CAS号 |
|---|---|---|---|---|
| Ampicillin | 100 mg/mL | 1 mL | 100 μg/mL | 69-53-4 |
| IPTG | 24 mg/mL | 1 mL | 24 μg/mL | 367-93-1 |
| X-Gal | 20 mg/mL | 2 mL | 40 μg/mL | 7240-90-6 |
配制步骤
第一步：配制磷酸盐缓冲液（100 mL）
称取2.31 g KH₂PO₄和12.54 g K₂HPO₄，溶于约90 mL去离子水中，定容至100 mL。
高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min），备用。
第二步：配制TB基础培养基（1 L）
称取12 g Tryptone、24 g Yeast Extract，量取4 mL Glycerol，置于1 L烧杯中。
加入约800 mL去离子水，充分搅拌溶解。
加去离子水定容至1 L后，加入15 g Agar，充分搅拌至无颗粒。
高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min），冷却至60 ℃备用。
第三步：添加缓冲液与添加剂
在超净台内无菌操作，依次加入：
100 mL灭菌磷酸盐缓冲液
1 mL Ampicillin（100 mg/mL）
1 mL IPTG（24 mg/mL）
2 mL X-Gal（20 mg/mL）
每加入一种后快速摇匀。
第四步：铺板
铺制平板（30～35 mL培养基/90 mm培养皿）。
室温凝固后倒置，4 ℃避光密封保存，尽快使用。
TB vs LB 蓝白斑筛选平板对比
| 比较项 | LB蓝白斑平板 | TB蓝白斑平板（本方案） |
|---|---|---|
| Tryptone | 1%（10 g/L） | 1.2%（12 g/L） |
| Yeast Extract | 0.5%（5 g/L） | 2.4%（24 g/L） |
| Glycerol | 无 | 0.4% |
| 缓冲体系 | 无 | 磷酸盐缓冲液 |
| 菌落大小 | 常规（1～2 mm） | 较大（2～3 mm） |
| 筛选清晰度 | 良好 | 更清晰（营养丰富，显色充分） |
| 适用场景 | 常规蓝白斑筛选 | 高密度蓝白斑筛选、蛋白表达克隆 |
关键注意事项
| 要点 | 说明 |
|---|---|
| 安全防护 | 5N NaOH具强腐蚀性，需戴手套、护目镜，逐滴慢加并搅拌 |
| 添加剂储存 | Ampicillin、IPTG、X-Gal均-20 ℃储存，X-Gal全程避光操作 |
| 添加温度 | 仅在培养基冷却至60 ℃时添加，用无菌移液管，防交叉污染 |
| pH校准 | pH计校准后再测，微调至所需值 |
| 铺板准备 | 培养皿提前紫外线消毒30分钟以上，除尽气泡 |
| 平板保存 | 凝固后倒置，严防冷凝水污染，4℃避光密封保存 |
主要应用
高密度蓝白斑筛选（TB营养支持更大菌落，显色更清晰）
含Amp抗性及lacZα互补载体的重组克隆筛选
高表达载体的克隆筛选
