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LB/Amp/X-Gal/IPTG 蓝白斑筛选平板（1 L）
LB/Amp/X-Gal/IPTG 蓝白斑筛选平板（1 L）
基本属性
| 属性 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | LB/Amp/X-Gal/IPTG 蓝白斑筛选平板 |
| 规格 | 1 L（约30～35块/90 mm培养皿） |
| 筛选标记 | Ampicillin（100 μg/mL） |
| 显色系统 | X-Gal（40 μg/mL）+ IPTG（24 μg/mL） |
| 保存条件 | 4 ℃避光倒置密封保存（尽快使用） |
| 主要用途 | 蓝白斑筛选（含Amp抗性及lacZα互补系统的重组克隆筛选） |
配方组成（1 L体系）
| 组分 | 用量 | 终浓度 | CAS号 |
|---|---|---|---|
| Tryptone（胰蛋白胨） | 10 g | 1%（W/V） | 91079-40-2 |
| Yeast Extract（酵母提取物） | 5 g | 0.5%（W/V） | 8013-01-2 |
| NaCl（氯化钠） | 10 g | 1%（W/V） | 7647-14-5 |
| Agar（琼脂） | 15 g | 1.5%（W/V） | 9002-18-0 |
| Ampicillin（100 mg/mL储备液） | 1 mL | 100 μg/mL（0.1 mg/mL） | 69-53-4 |
| IPTG（24 mg/mL储备液） | 1 mL | 24 μg/mL（0.024 mg/mL） | 367-93-1 |
| X-Gal（20 mg/mL储备液） | 2 mL | 40 μg/mL（0.04 mg/mL） | 7240-90-6 |
| 5N NaOH | 约0.2 mL | 调pH至7.0 | 1310-73-2 |
| 去离子水 | 定容至1 L | — | — |
配制步骤
称取10 g Tryptone、5 g Yeast Extract和10 g NaCl，置于1 L烧杯中。
加入约800 mL去离子水，充分搅拌溶解。
滴加5N NaOH（约0.2 mL），调节pH至7.0。
加去离子水定容至1 L后，加入15 g Agar，充分搅拌至无颗粒。
高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min），冷却至60 ℃备用。
在60 ℃时依次加入：
1 mL Ampicillin（100 mg/mL）
1 mL IPTG（24 mg/mL）
2 mL X-Gal（20 mg/mL）
每加入一种后快速摇匀。铺制平板（30～35 mL培养基/90 mm培养皿）。
室温凝固后倒置，4 ℃避光密封保存。
关键注意事项
| 要点 | 说明 |
|---|---|
| 添加剂储存 | Ampicillin、IPTG、X-Gal均-20 ℃储存，X-Gal全程避光操作，使用前解冻摇匀 |
| X-Gal避光 | X-Gal对光敏感，配制全程避光操作（使用棕色管/铝箔包裹） |
| 添加温度 | 60 ℃时无菌添加试剂，温度过高破坏抗生素/IPTG/X-Gal，过低培养基凝固无法混匀 |
| 防止交叉污染 | 专人专管移液管，每种添加剂使用独立移液管/吸头 |
| 倒置保存 | 平板凝固后倒置，4 ℃避光密封保存，尽快使用，防止污染及X-Gal失效 |
蓝白斑筛选原理
| 菌落颜色 | 结果 | 说明 |
|---|---|---|
| 蓝色菌落 | 非重组（载体自连） | lacZα基因完整，β-半乳糖苷酶有活性，X-Gal被水解为蓝色产物 |
| 白色菌落 | 重组（含外源插入） ✅ | lacZα基因被破坏，β-半乳糖苷酶无活性，X-Gal不被水解，菌落呈白色 |
💡 筛选要点：白色菌落为阳性重组子，是后续实验的目标菌落。
使用指南
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| ① | 转化后菌液涂布于平板表面（约100～200 μL/板） |
| ② | 37 ℃倒置培养12～16小时（过夜） |
| ③ | 观察蓝白色菌落，挑取白色菌落进行后续鉴定 |
主要应用
蓝白斑筛选（pUC/pBluescript等lacZα互补载体）（核心应用）
重组克隆阳性筛选
连接产物转化后筛选
