Solution I 质粒提取重悬液（1 L 配制方案）

产品概述

Solution I 是碱裂解法质粒DNA提取流程中的第一步核心试剂，用于将过夜培养的细菌沉淀温和重悬为均匀的单细胞悬液。作为质粒提取的“第一道防线”，其配制质量直接影响后续裂解效率和质粒最终得率。本品为1 L规格配制方案，适用于分子生物学实验中质粒相关研究的常规提取需求。

组分与配方（1 L体系）

各组分核心功能：

• Tris-HCl（pH 8.0） ：维持体系pH稳态，避免质粒因酸碱失衡发生构象改变或降解。

• EDTA：螯合Mg²⁺等二价金属离子，抑制DNase活性，防止质粒DNA被降解。

• Glucose（葡萄糖） ：维持渗透压平衡，增加溶液粘度以减少机械剪切力，保护细菌细胞膜与质粒完整性。

配制与灭菌流程

1. 按上表准确量取各组分，于1 L烧杯中混合，加dH₂O定容至1 L。

2. 充分搅拌混匀后，进行高温高压灭菌（121 ℃，15–20 min）。

3. 灭菌完成后冷却至室温，于4 ℃密封保存。

4. 使用前按每50 mL Solution I加入2 mL RNase A（20 mg/mL）的比例添加RNA酶，混匀后即用。

⚠️ RNase A必须在使用前添加，不可与Solution I一同灭菌，否则会导致RNase A失活，无法有效去除RNA杂质。

操作要点与注意事项

1. 无菌控制
Solution I直接接触过夜培养的细菌沉淀，必须严格灭菌，避免杂菌污染影响质粒提取纯度与产量。

2. 重悬必须充分
重悬细菌沉淀时，必须确保无肉眼可见的菌块，否则会导致后续裂解不完全，显著降低质粒提取量。建议使用涡旋振荡或移液枪反复吹打至完全分散。

3. 建议冰上操作
重悬过程建议在冰上进行，以减缓细菌代谢活动，进一步保护质粒完整性。

4. 保存规范

• 灭菌后的Solution I于4 ℃密封保存，有效期不超过1个月。

• 添加RNase A后的Solution I需现配现用，避免RNase A活性下降。

应用场景

本品适用于碱裂解法质粒DNA提取中的细菌重悬步骤，用于重悬过夜培养的E. coli等细菌沉淀。重悬后的菌体可进入后续裂解（Solution II）与中和（Solution III）步骤，完成质粒DNA的提取全流程