名称:免提取核酸释放剂
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免提取核酸释放剂的核心功能组分是表面活性剂。以脂肽类表面活性剂Surfactin为例,它可通过溶解和破坏病毒/细胞的磷脂双分子层,快速释放完整的核酸分子,使病毒DNA/RNA充分游离。配方中常与Triton X-100、SDS等非离···
详细说明:
免提取核酸释放剂的核心功能组分是表面活性剂。以脂肽类表面活性剂Surfactin为例,它可通过溶解和破坏病毒/细胞的磷脂双分子层,快速释放完整的核酸分子,使病毒DNA/RNA充分游离。配方中常与Triton X-100、SDS等非离子型或阴离子型表面活性剂协同使用,以提高对不同类型样本的裂解效率。
常见配方还包括螯合剂(如EDTA,用于螯合金属离子、抑制核酸酶活性)、保护剂(如海藻糖、PEG8000,在核酸表面形成保护层防止降解)、缓冲体系(如Tris-HCl,维持pH稳定)等。市售产品的典型成分为氢氧化钠、Tris-HCl、表面活性剂等,部分配方还包含酶、微球等辅助组分,可在室温下将样本中的细胞和病毒快速分解。
以液体样本为例:取50-100μL样本加入100-150μL释放剂中,反复吹打混匀,室温静置2-5分钟,对于拭子样本,将拭子头浸入释放剂中,摇晃混匀后室温放置5-10分钟,处理完成后,直接取2-5μL上清液作为模板加入PCR/恒温扩增反应体系即可。注意模板体积一般不超过反应总体积的10%。
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