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5×TBE缓冲液是核酸电泳实验中常用的浓缩储备液,由Tris碱、硼酸和EDTA组成,使用时需稀释至1×或0.5×工作浓度。与10×TBE相比,5×TBE不易因温度变化析出沉淀,储存稳定性更好,因此是更常规的储存形式。其核心配方为445mM Tris-硼酸、10mM EDTA,pH通常在8.2-8.4之间。
TBE的缓冲能力强,适合较长时间的电泳运行,尤其对小于1kb的DNA片段分离效果良好。在较高浓度的琼脂糖凝胶中,TBE对小分子量核酸的分辨率优于TAE。而在聚丙烯酰胺凝胶电泳中,PAGE对缓冲容量要求更高,TBE是更为通用的选择。还提供经DEPC处理的RNase-free级5×TBE,可直接用于RNA电泳,无需额外处理即可避免RNase污染风险。
TBE与TAE的选择需根据实验目的权衡。TBE的优势在于缓冲能力强、分辨率高,适合长时间电泳或小片段DNA的分离。然而,TBE中的硼酸成分会与DNA骨架上的羟基形成复合物,影响DNA回收效率,同时残留的硼酸是许多酶的强效抑制剂,可能抑制限制性内切酶、连接酶等后续酶反应。若电泳后需进行DNA凝胶回收或酶切实验,建议改用TAE缓冲液。
配制1×TBE工作液时,将1份5×TBE与4份蒸馏水或去离子水混合即可得到含有89mM Tris-硼酸、2mM EDTA的1×工作液。TBE在低温下可能析出沉淀,若出现此情况,置于37℃水浴中加热溶解后摇匀即可,不影响使用效果。室温密封保存即可,有效期通常为12个月。
杭州富沃克生物科技有限公司提供多种规格的5×TBE缓冲液产品,采用高纯原料配制,适用于琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等核酸分析实验场景。
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