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名称:蛋白酶k
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蛋白酶K溶液,能高效降解蛋白质并灭活核酸酶。在DNA/RNA提取过程中,可彻底裂解细胞、消化各类蛋白杂质,有效释放并保护核酸完整性,是获得高纯度核酸的关键试剂。
详细说明:

蛋白酶K溶液

蛋白酶K溶液(Proteinase K Solution)是一种活性稳定的广谱丝氨酸蛋白酶,能高效降解蛋白质并有效灭活核酸酶,是分子生物学实验中不可或缺的核心工具酶。本品为即用型溶液,浓度精准,经纯化去除RNase和DNase活性,可广泛应用于DNA/RNA提取、蛋白质印迹、原位杂交等多种实验场景。

产品来源与性质

蛋白酶K来源于真菌林伯氏白色念珠菌(Tritirachium album) ,属于枯草杆菌蛋白酶家族的丝氨酸蛋白酶。其分子量约为28.9-29.3 kDa

本品为即用型溶液(浓度通常为10 mg/mL或20 mg/mL),经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性,可直接使用,无需称量、溶解等繁琐步骤。

技术原理

1. 高效降解蛋白质

蛋白酶K能够切割脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键,可降解与核酸结合的蛋白质(如组蛋白),使DNA和RNA从样品中释放出来,游离到提取液中

2. 快速灭活核酸酶

蛋白酶K可快速灭活内源核酸酶(如RNase和DNase),保护核酸在提取过程中免受降解。这一特性使其特别适用于从组织或细胞中分离天然RNA和DNA

3. 在变性剂中活性增强

EDTA等螯合剂或SDS等去垢剂不能使蛋白酶K失活,反而增强和稳定酶活性。在变性剂如SDS(1%)高温(50-60℃) 存在下,其活性增加

核心优势

1. 广谱pH与温度适应性

蛋白酶K在较广的pH范围(pH 4.0-12.5)内均有活性,最佳pH范围为pH 7.5-8.0。在高温(50-70℃)下仍保持活性,理想孵育温度为55-58℃

2. 对变性环境高度稳定

本品在尿素SDS中稳定,在0.1-0.5% SDS存在下可保持活性。EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、盐酸胍等对蛋白酶K的活力影响不大

3. 高纯度,无核酸酶污染

本品经严格质量控制,不含可检测的DNase和RNase,确保不会对核酸样品造成额外降解。

4. 即用型溶液,使用便捷

本品为预配制的即用型溶液,开瓶即用,无需自行称量、溶解和配制,避免了称量损耗和操作误差,显著提高实验效率。

产品规格

项目规格详情
产品名称蛋白酶K溶液(Proteinase K Solution)
CAS号39450-01-6
来源林伯氏白色念珠菌(Tritirachium album)
分子量~29 kDa
浓度10 mg/mL、20 mg/mL等多种规格
活性≥300 U/mL(35℃)、≥600 mAnsonU/mL、≥800 U/mL
DNase/RNase未检出(None detected)
外观无色透明液体
保存条件2-8℃;长期保存可置于-20℃
有效期12-24个月

核心应用场景

1. 核酸提取(最核心应用)

蛋白酶K在DNA和RNA提取过程中扮演着至关重要的角色。它能够降解与核酸结合的蛋白质,使DNA和RNA从样品中释放出来;同时快速灭活内源核酸酶(如RNase和DNase),保护核酸免受降解

2. 原位杂交(ISH)

在原位杂交技术中,蛋白酶K通常用于杂交前标本的处理,具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以利于检测探针的穿透,提高检测的敏感性

3. 蛋白质印迹(Western Blot)

蛋白酶K可用于制备脉冲电泳的染色体DNA蛋白质印迹等实验。也可用于石蜡包埋组织切片的处理,暴露用于抗体标记的抗原结合位点

4. 病毒核酸检测

在新冠病毒等病毒核酸检测中,蛋白酶K是病毒采样液的重要组分,可裂解病毒释放核酸,消除核酸分解酶(RNase)以防止病毒RNA降解,同时可灭活病毒,提高运输和检测阶段的安全性

5. 其他应用

  • 去除内毒素:去除与阳离子蛋白(如溶菌酶和核糖核酸酶A)结合的内毒素

  • 细胞裂解:通过激活细菌自溶因子而促进细胞裂解

  • 膜结构分析:通过修饰细胞表面的蛋白质和糖蛋白来分析膜结构

使用与储存建议

1. 工作浓度

蛋白酶K的常用工作浓度为50-100 μg/mL;对于组织处理,推荐工作浓度为2 mg/mL

2. 孵育条件

建议孵育温度为55-65℃,理想孵育温度为58℃。在37℃下,孵育时间通常为30分钟至2小时

3. 灭活方法

蛋白酶K可通过95℃加热10分钟实现完全失活

4. 储存条件

本品建议2-8℃保存。如需更长期保存,可置于-20℃冷冻保存避免反复冻融

5. 注意事项

  • 本品仅供科研使用,不得用于临床诊断或治疗

  • 操作时请穿实验服并戴一次性手套

  • 高浓度EDTA会抑制蛋白酶K活性,使用时需注意缓冲液中金属离子的浓度

  • 蛋白酶K溶液为无色透明,如出现沉淀就不能再使用

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