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PCR跑不出来？问题可能出在“水”上
一、ddH₂O是什么？先搞懂一个概念
ddH₂O，全称double distilled water，中文叫双蒸水。说白了就是蒸馏了两次的水。
第一次蒸馏能去掉大部分无机盐和不挥发杂质，但水中的挥发性组分（比如氨、二氧化碳、有机物）还会跟着蒸汽跑进水里。再蒸一次，就能把这些残留的挥发性杂质进一步甩掉。两次蒸馏下来，水里的无机盐、有机物、微生物、可溶解气体和挥发性杂质含量都降到了极低的水平。
在实验室用水的纯度序列里，ddH₂O的纯度高于普通蒸馏水和纯水（RO水） ，其电导率通常≤1 μS/cm，电阻率约0.5~1 MΩ·cm。而经过离子交换等多步纯化的超纯水（25℃时电阻率18.2 MΩ·cm）纯度则更高。
二、一张表看懂：不同实验该用什么水？
关键提醒：RNA相关实验必须使用DEPC处理水（RNase-free ddH₂O） ，普通双蒸水不适合用于RNA实验。三、ddH₂O怎么制备？
| 步骤 | 操作 | 关键说明 |
|---|---|---|
| ① 一次蒸馏 | 将纯水或去离子水加入蒸馏装置，加热蒸馏，收集冷凝水 | 建议弃去最初约10%~20% 的馏出液，以去除挥发性杂质和系统残留物 |
| ② 二次蒸馏 | 将第一次收集的蒸馏水再次蒸馏 | 同样建议弃去初馏液，收集中段馏分 |
| ③ 灭菌（可选） | 如需无菌水，121℃高压灭菌15~20分钟 | 灭菌后称为无菌双蒸水 |
四、关于DEPC处理水
RNA实验需使用DEPC处理水（RNase-free ddH₂O） ，制备方法为：
在ddH₂O中加入0.1%（体积比）DEPC（焦碳酸二乙酯） ，剧烈振荡后室温静置数小时，再经121℃高压灭菌15~20分钟去除残留DEPC。
| 提醒 | 说明 |
|---|---|
| DEPC为潜在致癌物 | 操作需在通风橱中进行并佩戴手套 |
| Tris缓冲液不能用DEPC处理 | DEPC会与Tris反应生成氨基甲酸酯 |
| 必须彻底高压灭菌 | 去除残留DEPC，否则残留物会抑制酶反应 |
| 建议分装保存 | 避免反复开启引入污染 |
五、常见问题速查
| 问题 | 原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| PCR扩增不出条带 | 水中含DNase或离子杂质 | 改用ddH₂O或PCR级超纯水 |
| 空白对照出现阳性 | 水被核酸污染 | 更换新鲜ddH₂O；使用无菌操作 |
| RNA实验条带降解 | 水中含RNase | 必须使用DEPC处理水 |
| 配制试剂很快失效 | 水中含微生物 | 使用前过滤除菌或高压灭菌；现配现用 |
六、省心之选：直接买现成的
杭州富沃克生物科技有限公司提供：
| 产品名称 | 规格 | 产品货号 |
|---|---|---|
| ddH₂O | 1mL / 10mL / 100mL | DDH606-01/02/03 |
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参考文献
[1] 双蒸水[EB/OL]. 百度百科, 2026-02-10.
[2] 重蒸馏水[EB/OL]. 百度百科, 2026-02-12.
[3] 实验室用水区别与要求[EB/OL]. 2025-05-28.
[4] DEPC水和DEPC处理水的区别[EB/OL]. 索莱宝生物, 2015-08-19.
[5] 实验室常见用水区别[EB/OL]. 天根生化, 2026-01-05.
[6] 超纯水设备常见问答[EB/OL]. Sartorius.
