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血液一抽就凝？细胞实验总翻车？问题可能出在抗凝液上
血液一抽就凝？细胞实验总翻车？问题可能出在抗凝液上
做血液相关实验的同学都懂——好不容易采到的新鲜血液，还没来得及处理就凝固了；或者加了抗凝剂，基因组DNA得率却低得可怜。你换了采血方式、调了离心参数、检查了所有试剂，最后发现是抗凝液本身就没选对。
柠檬酸葡萄糖溶液B（ACD-B） 是血液保存中最经典的“抗凝守护者”——螯合钙离子阻止凝血、为红细胞提供能量、保护血细胞完整性。那ACD-B到底是什么？怎么用才靠谱？
一、ACD-B是什么？先记住三个关键词
柠檬酸葡萄糖溶液B，全称 Acid-Citrate-Dextrose Solution B，简称 ACD-B，是一种由柠檬酸、柠檬酸钠和葡萄糖按特定比例配制的无菌抗凝溶液。
ACD保存液是1943年由Loutit和Mollison研发的经典血液保存液，主要用于全血和红细胞的液态保存。
ACD-B的核心功能有三重：
柠檬酸钠：螯合血液中的钙离子（Ca²⁺），阻断凝血级联反应，防止血液凝固
柠檬酸：维持溶液微酸性（pH约5.0），防止葡萄糖在高温灭菌时焦化
葡萄糖：为红细胞代谢提供能量，延长红细胞的保存时间
ACD-A vs ACD-B 怎么选？
ACD溶液分为A和B两种处方：
| 对比项 | ACD-A | ACD-B |
|---|---|---|
| 柠檬酸 | 8.0 g/L | 4.8 g/L |
| 柠檬酸钠 | 22 g/L | 13.2 g/L |
| 葡萄糖 | 24.5 g/L | 14.7 g/L |
| 用量（每100mL血） | 15 mL | 25 mL |
| 适用场景 | 常规采血、血库保存 | 需更温和抗凝条件的实验 |
B处方各组分浓度约为A的60%。两者在4℃均可保存血液21天。ACD-A浓度高、用量少，适用于常规采血；ACD-B浓度较低，用量更大，适用于需要更温和抗凝条件的实验场景。
二、配方速查表
| 组分 | 浓度（w/v） | 配制用量（1 L） |
|---|---|---|
| 柠檬酸（C₆H₈O₇·H₂O） | 0.48% | 4.8 g |
| 柠檬酸钠（Na₃C₆H₅O₇·2H₂O） | 1.32% | 13.2 g |
| 葡萄糖（C₆H₁₂O₆·H₂O） | 1.47% | 14.7 g |
| 注射用水 | — | 定容至1 L |
最终pH约为5.0。自行配制时可采用0.22 μm过滤除菌或121℃高压灭菌15分钟，确保溶液无菌。
三、ACD-B怎么用？操作指南
使用比例：每6 mL新鲜血液加入1 mL ACD-B溶液。
操作步骤：
采血前准备：将ACD-B溶液恢复至室温，取适量置于无菌离心管中
采血：按6:1的比例采集新鲜血液（如6 mL血 + 1 mL ACD-B）
混匀：立即轻轻颠倒混匀5-8次，避免剧烈振荡（防止溶血）
保存：已加ACD-B的抗凝血于2-6℃保存，可保存21天
DNA提取：取抗凝血直接用于基因组DNA提取实验
四、关键提醒
| 类别 | 要点 |
|---|---|
| 无菌操作 | ACD-B为无菌溶液，使用过程中需注意防止污染 |
| ACD-B溶液保存 | 4℃密封保存，有效期一年；分装使用可避免反复开启污染 |
| 抗凝血保存 | 已加ACD-B的抗凝血应于2-6℃保存，避免反复开盖和温度波动 |
| 仅供科研 | 本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗 |
| 安全防护 | 配制时注意柠檬酸粉末具刺激性，操作时佩戴口罩、手套，在通风橱中称量；使用成品时请穿实验服并戴一次性手套操作 |
五、常见问题速查
| 问题 | 原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 加了ACD-B血液还是凝固了 | 比例不对或混匀不充分 | 确认6:1比例；采血后立即轻轻颠倒混匀5-8次 |
| DNA提取得率低 | 抗凝不充分导致细胞破裂 | 检查ACD-B是否过期；确认抗凝血保存温度是否在2-6℃ |
| 抗凝血保存不到21天就变质 | 保存温度不稳定、容器不洁或采血时未严格无菌 | 确保2-6℃恒温；使用无菌容器；采血时严格无菌操作 |
| 溶液颜色变黄或出现沉淀 | 葡萄糖焦化或微生物污染 | 立即停用，重新配制 |
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杭州富沃克生物科技有限公司推出的柠檬酸葡萄糖溶液B（ACD，无菌）：
| 产品名称 | 规格 | 产品货号 |
|---|---|---|
| 柠檬酸葡萄糖溶液B | 50mL / 100mL / 250mL / 500mL / 1000mL | NMS606-01—NMS606-05 |
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[1] 柠檬酸葡萄糖溶液B (ACD, 无菌)（ST496-100ml）产品说明书[EB/OL]. 碧云天生物技术. https://r.beyotime.com/product/ST496-100ml.htm
[2] Loutit JF, Mollison PL. The preservation of blood. In: Medical Research Council (UK). The Preservation of Blood for Transfusion[J]. 1943. （ACD保存液原始文献）
[3] 血液保存液Ⅱ说明书[EB/OL]. 广生药路通网. https://www.yaolutong.com
[4] 柠檬酸葡萄糖溶液B 强效抗凝缓冲液[EB/OL]. 杭州富沃克生物科技有限公司. https://www.fwkbio.com
