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核酸提取又慢又烦？试试免提取释放剂，5分钟裂解，告别过柱离心！
一、免提取核酸释放剂是什么？三个字讲清楚
免提取核酸释放剂是一种专门用于样本前处理的裂解型试剂，核心功能就三个字：裂、释、稳——裂解细胞/病毒外壳、释放核酸、保护核酸不被降解。
使用释放剂后，样本裂解物可以直接作为模板用于PCR或等温扩增，省去所有提取纯化步骤。整个过程从“取样→提取→扩增”简化为“取样→裂解→扩增”，时间从半小时压缩到5-10分钟。
二、核心成分与功能速查
市面上核酸释放剂的配方各有侧重，但核心功能模块基本一致。下表整理了几条主流技术路线中使用的关键成分及其作用：
| 成分类别 | 常见原料 | 核心作用 | 参考浓度 |
|---|---|---|---|
| 表面活性剂 | Triton X-100、Tween-20、SDS | 破坏细胞膜/病毒包膜及核衣壳蛋白，裂解释放核酸 | Triton/Tween: 0.1%~2%；SDS: 0.1%~0.5% |
| 碱性剂 | NaOH、KOH | 碱性环境破坏蛋白结构，辅助核酸变性释放 | 0.005%~0.05%（病毒用低限，细菌/环境样本用高限） |
| 缓冲体系 | Tris-HCl | 稳定pH，为核酸提供适宜的保存环境 | 10~50 mM（pH 7.5~8.5） |
| 螯合剂 | EDTA | 螯合金属离子，抑制DNase/RNase活性 | 0.1~5 mM |
| 核酸保护剂 | 海藻糖、PEG8000、BSA | 在核酸表面形成保护层，维持核酸稳定 | 海藻糖0.1~0.5 M |
| 还原剂 | DTT、β-巯基乙醇 | 打断蛋白二硫键，辅助裂解 | DTT 10~50 mM |
三、配制方案（以常用的碱性裂解体系为例）
| 步骤 | 操作 | 关键说明 |
|---|---|---|
| ① 配缓冲液 | 将Tris-HCl（终浓度10~50 mM）溶于无酶无菌水中，pH调至7.5~8.5 | 使用Tris-HCl成品粉末可直接配制，无需额外调pH |
| ② 加表面活性剂 | 缓慢加入Triton X-100（终浓度0.5%~2%）或Tween-20，持续搅拌至完全溶解 | — |
| ③ 加螯合剂+保护剂 | 加入EDTA（终浓度1~5 mM）和海藻糖（终浓度0.1~0.5 M），混匀 | — |
| ④ 最后加碱性剂 | 缓慢加入NaOH（终浓度0.01%~0.05%），搅拌均匀 | 碱性剂最后加，避免与其他成分提前反应 |
| ⑤ 定容与分装 | 加无酶无菌水定容，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 若配制环境洁净度足够，可省略过滤，改用无菌操作配制。分装至无菌离心管中，室温或4°C保存 |
四、关键注意事项
| 类别 | 要点 |
|---|---|
| 加样顺序 | 碱性剂必须最后加，避免与其他成分提前反应失效 |
| 无核酸酶环境 | 所有器具和溶剂必须无核酸酶，否则释放的核酸会被迅速降解 |
| 洁净操作 | 配制全程在洁净区操作，避免外源核酸污染 |
| PCR抑制风险 | 表面活性剂浓度过高可能抑制下游PCR，建议根据扩增体系进行预实验验证 |
| 保存期限 | 配制好的释放剂建议一周内用完，不宜长期存放 |
五、省心之选：直接买现成的
杭州富沃克生物科技有限公司推出的免提取核酸释放剂：
| 产品名称 | 规格 | 产品货号 |
|---|---|---|
| 免提取核酸释放剂 | 1 mL / 10 mL | MTQ606-01 |
📞 厂家联系微信号：19850855600
📧 邮箱：support@fwkbio.com
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参考文献
[1] 内蒙古某生物技术企业. 样本释放剂（新闻报道）[N]. 科技日报, 2020-10-21.
[2] 湖南圣湘生物科技有限公司. 核酸释放剂、核酸PCR扩增方法和PCR扩增试剂盒: CN109402240A[P]. 2019-03-01.
[3] 闫亚平, 张鑫. 一种核酸免提取试剂及其在核酸检测中的应用和使用方法: CN112522370A[P]. 2021-03-19.
[4] 一种鼻/咽拭子免核酸提取试剂及其应用: CN202411135992[P]. 2024.
