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RNA提取纯度总翻车？试试8M LiCl二次沉淀，把DNA和蛋白“筛”出去
一、8M LiCl到底是什么？先搞懂原理
简单说，8M LiCl就是浓度为8 mol/L的氯化锂水溶液。氯化锂分子式LiCl，分子量42.39，CAS号7447-41-8。
它在实验室里最核心的用途是选择性沉淀RNA——在高浓度锂离子作用下，RNA会沉淀下来，而DNA、蛋白质和游离核苷酸基本留在上清。这就像用筛子筛面粉——RNA被筛出来了，杂质留在上面。
⚠️ 适用性提醒：该法对大分子RNA（如rRNA、mRNA） 沉淀效率较高，而小分子RNA（如tRNA、5S rRNA） 在4M LiCl浓度下主要保留在上清中；当LiCl浓度升至8M时，小分子RNA可部分共沉淀。如果你的实验目标是回收所有RNA（包括小RNA） ，需谨慎评估此法是否适用。
💡 操作定位：初次沉淀仍建议使用异丙醇或乙醇（快速、广谱），8M LiCl更适合在初次沉淀后对RNA进行“精纯化”——去除残留的DNA和蛋白质。
此外，8M LiCl还常用于制备染色质免疫沉淀（ChIP）的洗涤缓冲液、RIPA洗涤缓冲液等。
二、什么时候需要做“二次精纯”？
| 情况 | 是否需要8M LiCl二次沉淀 |
|---|---|
| 常规细胞/组织RNA提取，纯度OK | ❌ 不需要 |
| 提取后A₂₆₀/A₂₈₀＜1.8（蛋白污染） | ✅ 推荐 |
| 提取后A₂₆₀/A₂₃₀＜2.0（盐/有机溶剂污染） | ⚠️ 需排查原因，可能需其他处理 |
| 下游实验对DNA残留高度敏感（如qPCR） | ✅ 推荐 |
| 样本富含多糖/多酚（如植物组织） | ✅ 推荐 |
| 目标是回收小RNA（如miRNA） | ❌ 不推荐（小RNA会损失） |
三、配方成分一览表
配制8M LiCl溶液，核心就两样东西，但化学纯度与生物学活性需分开把控：
| 成分 | 化学指标 | 生物学指标 | 作用 |
|---|---|---|---|
| 氯化锂（LiCl） | 分子生物学级，纯度≥99% | DNase/RNase活性：未检出 | 溶质，提供锂离子 |
| 超纯水 | 18兆欧水，DEPC处理 | 不含核酸酶 | 溶剂，去除酶污染 |
四、配制方案速查（以1 L为例）
| 步骤 | 操作 | 关键说明 |
|---|---|---|
| ① 计算称量 | 称取339.12 g LiCl（8 × 42.39） | 20°C溶解度为832 g/L，339 g/L完全可溶 |
| ② 溶解 | 取约800 mL DEPC处理水于烧杯，开启磁力搅拌 | 缓慢分批加入LiCl——溶解过程强烈放热 |
| ③ 冷却 | 必须待溶液完全冷却至室温后再定容 | 否则热胀冷缩导致体积不准，浓度偏高 |
| ④ 定容 | 加水定容至1 L，充分混匀 | — |
| ⑤ 除菌 | 0.22 μm滤膜过滤除菌 | ✅ 最推荐（市售成品可采用高压灭菌工艺，但实验室自行配制时优先推荐过滤除菌，以避免浓度漂移风险） |
| ⑥ 分装 | 按单次用量分装（如50 mL/瓶） | 避免反复取用引入污染 |
| ⑦ pH记录 | 记录pH值（通常在5~7之间） | 作为批次质控记录，便于问题追溯 |
| 保存条件 | 4°C保存 | 一年内有效 |
五、关键注意事项
| 类别 | 要点 |
|---|---|
| 原料纯度 | 必须使用分子生物学级LiCl，确保DNase/RNase free |
| 水质 | 必须使用DEPC处理水，防止核酸酶污染 |
| 放热风险 | LiCl溶解强烈放热，须缓慢分批加入，待冷却至室温后再定容 |
| 除菌方式 | 优先0.22 μm滤膜过滤；市售成品可采用高压灭菌，但实验室自行配制时不推荐高压灭菌（浓度漂移风险） |
| 分装保存 | 按单次用量分装，4°C保存；使用后立即盖紧瓶盖（LiCl具吸湿性） |
| 质控记录 | 配制后记录pH值，作为批次质控 |
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参考文献
[1] 碧云天生物技术. 8M LiCl (DNase/RNase free)（ST498-100mL）[EB/OL]. https://www.beyotime.com/product/ST498-100ml.htm, 2026-07-24.
[2] Sigma-Aldrich. Lithium chloride solution, 8 M, for molecular biology, ≥99% (L7026)[EB/OL]. https://www.sigmaaldrich.com/product/aldrich/l7026, 2026-07-24.
[3] MedChemExpress. Lithium chloride, for molecular biology, 99% (HY-Y0649D)[EB/OL]. https://www.medchemexpress.com/hy-y0649d.html, 2026-07-24.
[4] 广州美基生物科技有限公司. 8M LiCl产品说明[EB/OL]. https://www.magentech.com/product/8m-licl, 2026-07-24.
[5] 氯化锂溶解度数据[EB/OL]. https://www.chemicalbook.com/ChemicalProductProperty, 2026-07-24.
[6] Sambrook J, Russell DW. Molecular Cloning: A Laboratory Manual[M]. 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001.（第7.4节“沉淀RNA的锂离子选择法”及相关内容）
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