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从蛋白电泳到菌种保存：甘油溶液浓度怎么选、怎么配？
一、甘油是什么？
甘油，化学名丙三醇（C₃H₈O₃），CAS号56-81-5，分子量92.09【1】。它是一种无色、味甜、澄明的黏稠液体【1】，能从空气中吸收潮气【1】。它与水和乙醇能以任意比例混溶【1】。
注：甘油与水混合时存在轻微的体积收缩，配制v/v溶液时以定容方式为准【5】。
实验室核心用途【2】：
| 应用场景 | 典型浓度 | 作用 |
|---|---|---|
| 蛋白电泳上样缓冲 | 5%~10% | 增加样品密度，使样品沉入凝胶孔底【2】 |
| 菌种甘油冻存 | 20%~30% | 作为冷冻保护剂，防止冰晶损伤细胞【2】 |
| 蛋白质稳定剂 | 10%~50% | 防止蛋白质聚集和变性【2】 |
| 梯度凝胶制备 | 10%~60% | 辅助形成浓度梯度【2】 |
二、常见浓度一览表
不同实验场景对甘油浓度要求不同，以下是最常用的几种配方【3】【4】【5】：
| 浓度 | 应用场景 | 配制方法（100 mL） |
|---|---|---|
| 5%~10% | 蛋白电泳上样缓冲液【2】 | 取5~10 mL甘油，加水或缓冲液定容至100 mL【5】 |
| 20% | 常规生化试剂、润湿剂【5】 | 取20 mL甘油，加水定容至100 mL【5】 |
| 30% | 菌种甘油冻存（常用）【2】 | 取30 mL甘油，加水定容至100 mL【5】 |
| 50% | 高浓度储备液【4】 | 取50 mL甘油，加水定容至100 mL【5】 |
| 75% | 无菌甘油溶液【3】 | 取75 mL甘油，加水定容至100 mL【5】 |
| 80% | 高浓度储备液 | 取80 mL甘油，加水定容至100 mL【5】 |
| 100% | 纯甘油储备液【1】 | 直接使用【1】 |
💡 浓度单位说明：上表中“%”指体积百分比（v/v），即甘油体积/溶液总体积×100%【5】。甘油密度约1.25 g/mL【1】。如需配制质量百分比（w/w）溶液（如30g甘油+70g水），需按质量比直接混合，而非定容至100mL【5】。
⚠️ 菌种冻存特别提醒：配制菌种冻存液时，甘油终浓度通常为20%~30%【2】。实际操作中常用50%甘油储备液与菌液按1:1比例混合，甘油终浓度约为25%（介于20%~30%的适宜范围之间）【2】。
三、配制方法【5】
方法一：体积法（最常用，适合日常实验） 【5】
| 步骤 | 操作 | 关键说明 |
|---|---|---|
| ① | 根据目标浓度计算所需甘油体积（如配制30%甘油100mL，取30mL甘油）【5】 | — |
| ② | 将甘油加入约60~80mL去离子水或缓冲液中【5】 | 甘油黏度大，移取时用宽口枪头，慢速吸液【1】 |
| ③ | 用玻璃棒持续搅拌，使两者充分混合【5】 | 混合后溶液会因放热而升温，属正常现象 |
| ④ | 加水或缓冲液定容至100mL，充分摇匀【5】 | 冷却至室温后定容【5】 |
方法二：质量法（适用于需要精确浓度的实验） 【5】
| 组分 | 用量（配制100mL 30%甘油） | 说明 |
|---|---|---|
| 甘油 | 以甘油纯度为97%计算，约38.7g；若使用纯度≥99%的甘油，约37.9g【1】 | 实际用量应按产品标签纯度折算【1】 |
| 去离子水 | 定容至100mL【5】 | — |
四、🔑 关键提醒
| 关键点 | 说明 |
|---|---|
| 甘油极易吸湿【1】 | 配制和保存时必须密封、干燥、避光【1】，减少开盖频次【1】 |
| 黏度大，移液要耐心【1】 | 建议恒温放置降低黏度后使用【1】，选用宽口枪头慢速吸液，多次润洗枪头【1】 |
| 注意无菌操作【3】 | 用于细胞实验或菌种保存的甘油溶液【2】，建议使用无菌甘油【3】或配制后过滤除菌（0.22μm滤膜） 【3】 |
| 灭菌方式选择 | 甘油溶液可采用高压灭菌（121℃, 15-20分钟）（常规实验室常用方法，高浓度甘油灭菌后一般无明显变化），也可采用0.22μm滤膜过滤除菌（更温和，适用于对热敏感的溶液）【3】 |
| 配制环境要洁净【5】 | 器皿必须彻底清洗并干燥【5】，储存于密封良好的试剂瓶中【5】 |
| 低温可能分层【5】 | 低温环境下甘油溶液可能出现轻微分层【5】，使用前应室温回暖并充分混匀【5】，避免冷冻存放【5】 |
五、省心之选：直接买现成的
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参考文献
[1] 甘油(99%, Reagent grade)产品说明. 碧云天（beyotime.com）.
[2] 甘油——做辅助也是一把好手. biomart.cn, 2022.
[3] 甘油溶液(75%,无菌)产品说明. 伊塔生物, 2025.
[4] 甘油溶液(50%,无菌)产品说明. 南京森贝伽生物.
[5] 稀甘油试液配制方法. 39健康网, 2025（健康科普参考）.
[6] 高纯甘油溶液产品说明. 杭州富沃克生物（fwkbio.com）, 2026.
