电话：19850855600
手机：19850855600
邮箱：support@fwkbio.com
RIPA裂解液：蛋白提取第一步，选对配方才能拿到好数据
一、RIPA裂解液是什么？
RIPA裂解液是一种利用表面活性剂（去垢剂） 裂解细胞膜（包括核膜），从组织或细胞中抽取可溶性蛋白的缓冲液【1】【3】。
核心优势：裂解能力强，能同时提取胞浆蛋白、膜蛋白和核蛋白，裂解后得到的蛋白样品可以直接用于Western Blot、免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP）、ELISA等下游实验【4】【6】。
一句话：选对RIPA，蛋白提取就成功了一半。
二、RIPA裂解液的核心成分
RIPA裂解液主要由三部分组成：裂解成分 + 蛋白酶抑制剂 + 磷酸酶抑制剂【1】【5】。
核心裂解成分及作用
| 成分 | 类型 | 核心作用 |
|---|---|---|
| Tris-HCl（pH 7.4） | 缓冲剂 | 维持稳定的pH环境，保证蛋白活性【1】 |
| NaCl（150 mM） | 盐离子 | 调节离子强度，帮助蛋白溶解 |
| NP-40或Triton X-100（1%） | 非离子型去垢剂 | 温和破坏细胞膜，释放胞浆蛋白【5】 |
| 脱氧胆酸钠（0.5%） | 离子型去垢剂 | 强力破坏蛋白间相互作用，裂解核膜【3】 |
| SDS（0.1%） | 离子型去垢剂 | 强效增溶，帮助提取核蛋白和膜蛋白【2】 |
NP-40 vs Triton X-100：两者都是非离子型去垢剂，功能相似【5】。部分配方用NP-40，部分用Triton X-100。市面上强RIPA常用Triton X-100，中/弱RIPA常用NP-40【4】【5】。
Triton X-100法规提醒：Triton X-100（CAS:9002-93-1）已被列入欧盟REACH法规高关注物质（SVHC）候选清单。对于欧盟境内的商业用途已触发授权要求，但具体对科研实验室的影响视用量和用途而定。国内实验室暂未受限，但建议国际期刊投稿时关注审稿要求，或考虑替代品（如NP-40替代方案）。
蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂
| 抑制剂 | 抑制对象 | 关键说明 |
|---|---|---|
| PMSF | 丝氨酸蛋白酶 | 水溶液中半衰期约30-60分钟（室温下约30分钟，4℃时有所延长但仍需现配现用）【6】，必须现配现用，需在使用前数分钟内加入。PMSF不溶于水，需先用异丙醇或DMSO配成储存液（如100 mM）再按1:100比例加入裂解液 |
| Leupeptin | 丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶 | — |
| Aprotinin | 丝氨酸蛋白酶 | — |
| EDTA | 金属蛋白酶 | — |
| NaF / Na₃VO₄ | 磷酸酶 | 保护磷酸化蛋白不被去磷酸化【1】 |
三、强、中、弱三类RIPA怎么选？
RIPA裂解液根据裂解强度分为强、中、弱三类【2】【4】：
| 对比项 | RIPA（强） | RIPA（中） | RIPA（弱） |
|---|---|---|---|
| 去垢剂组合 | 1% Triton X-100 + 0.5%脱氧胆酸钠 + 0.1% SDS【2】 | 1% NP-40 + 0.5%脱氧胆酸钠 + 0.1% SDS【4】 | 1% NP-40 + 0.25%脱氧胆酸钠【4】 |
| 膜蛋白提取 | ⭐⭐⭐ 很好 | ⭐⭐ 较好 | ⭐ 一般 |
| 胞浆蛋白提取 | ⭐⭐⭐ 很好 | ⭐⭐⭐ 很好 | ⭐⭐⭐ 很好 |
| 核蛋白提取 | ⭐⭐⭐ 很好 | ⭐⭐ 较好 | ⭐⭐ 较好 |
| 适用场景 | 核蛋白、膜蛋白、难溶蛋白、总蛋白WB | 常规WB、IP | 温和裂解、Co-IP【4】 |
选择建议【4】【5】：
| 实验需求 | 推荐选择 | 关键考量 |
|---|---|---|
| 核蛋白、膜蛋白、难溶性蛋白（总蛋白WB） | 强RIPA | 充分提取，适合检测蛋白表达量变化【2】 |
| ChIP实验（研究蛋白-DNA相互作用） | 专用ChIP裂解液 | 强RIPA会破坏核小体结构，不适合此类实验 |
| 常规WB、IP | 中RIPA | 平衡裂解强度和蛋白完整性【4】 |
| Co-IP、需要保持蛋白天然构象 | 弱RIPA或专用Co-IP裂解液 | 温和裂解，保护蛋白相互作用【4】 |
| 磷酸化蛋白检测 | 含磷酸酶抑制剂的RIPA | 防止去磷酸化，确保信号真实【1】 |
四、使用方法（以中RIPA为例）
1. 准备工作
使用前数分钟内，向RIPA裂解液中加入PMSF至终浓度1 mM（或其他蛋白酶抑制剂混合物）【6】。PMSF不溶于水，需先用异丙醇或DMSO配成储存液（如100 mM），再按1:100比例加入裂解液中。PMSF在水溶液中半衰期极短（约30-60分钟），必须在使用前数分钟内现配现用【6】。
如果购买的RIPA已预混抑制剂，可直接使用。
2. 贴壁细胞裂解【4】
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| ① | 去除培养液，用预冷PBS洗一遍 |
| ② | 按6孔板每孔150-250 μL的比例加入预冷裂解液【4】 |
| ③ | 用移液器吸取裂解液后，沿孔壁反复吹打细胞表面5-8次（或轻轻刮取细胞），确保裂解液覆盖整个孔底 |
| ④ | 冰上放置5-10分钟【4】 |
| ⑤ | 4℃、12000g离心10分钟，取上清即为总蛋白【4】 |
| ⑥ | 蛋白浓度定量：取少量上清，用BCA法测定蛋白浓度【6】，用RIPA裂解液（不含抑制剂）或PBS稀释至各样品浓度一致（通常为1-5 mg/mL）。如需长期保存用于WB，可加入SDS-PAGE上样缓冲液后煮沸变性，分装-20℃保存 |
裂解效果检验：可用显微镜观察裂解后细胞碎片情况【1】，或比较不同裂解方法所得蛋白产量（BCA定量结果）【6】。
3. 悬浮细胞裂解【4】
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| ① | 离心收集细胞，去除培养基 |
| ② | 用手指轻弹管底将细胞分散 |
| ③ | 按6孔板每孔150-250 μL加入裂解液【4】 |
| ④ | 冰上放置5-10分钟，期间可轻弹混匀 |
| ⑤ | 4℃、12000g离心10分钟，取上清【4】 |
| ⑥ | 同上进行蛋白浓度定量 |
4. 组织样品裂解【4】
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| ① | 取50-100 mg组织，冰上剪成碎片 |
| ② | 用预冷PBS洗涤2次 |
| ③ | 加入按1:10（w/v） 比例计算的预冷RIPA裂解液（裂解液体积（mL）= 组织重量（mg）÷ 10，如100 mg → 1 mL，50 mg → 0.5 mL） |
| ④ | 用玻璃匀浆器冰上匀浆20-40次【4】 |
| ⑤ | 冰浴放置10分钟，每隔5分钟涡旋振荡30秒 |
| ⑥ | 4℃、12000g离心10分钟，取上清【4】 |
| ⑦ | 同上进行蛋白浓度定量 |
五、省心之选：直接买现成的
自己配RIPA裂解液虽然可行，但涉及多种去垢剂、缓冲液、抑制剂的精确配比，而且PMSF半衰期极短必须现配现用——步骤繁琐，稍有疏忽就会影响蛋白提取质量【6】。
如果追求省心省力、批次稳定，可以直接选择杭州富沃克生物科技有限公司的即用型RIPA裂解液系列：
📞 厂家联系微信号：19850855600
📧 邮箱：support@fwkbio.com
🔗 官网链接：科研级 RIPA 裂解液 组织细胞快速裂解试剂 分子实验 WB 蛋白提取溶液-富沃克生物科技（深圳）有限公司
参考文献
[1] RIPA裂解液-常用生化试剂[EB/OL]. 生物在线.
[2] Beyotime RIPA裂解液(强)产品说明书[EB/OL]. 生物谷（BioMart）.
[3] RIPA裂解液[EB/OL]. 生物谷（BioMart）, 2025.
[4] 蛋白提取系列专题——多方位获取您所需要的样本蛋白[EB/OL]. 翊圣（Yeasen）.
[5] 关于常见细胞裂解液及其组分介绍[EB/OL]. 生物谷（BioMart）, 2023.
[6] RIPA裂解液-细胞/组织裂解液缓冲液[EB/OL]. 翊圣（Yeasen）, 2018.
