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核酸电泳跑不好？先别怪DNA——可能是Loading Buffer没选对
核酸电泳跑不好？先别怪DNA——可能是Loading Buffer没选对
跑核酸电泳的朋友都懂——样品提好了、PCR扩出来了，结果上样时样品飘出孔、跑完看不清条带的位置……这些糟心事儿，很多时候不是因为DNA本身有问题，而是Loading Buffer没选对或没配好。
今天一篇讲清楚6× DNA Loading Buffer的核心作用、配方类型、配制要点和选择逻辑。
一、Loading Buffer是干什么的？
6× DNA Loading Buffer是核酸电泳前的“必备搭档”，核心干三件事【1】【3】：
增加密度：甘油或Ficoll让样品沉到点样孔底部，防止飘出
指示电泳进度：溴酚蓝、二甲苯青等染料随DNA一起迁移，告诉你“跑到哪儿了，该不该停”
保护DNA：EDTA螯合金属离子，抑制核酸酶降解DNA
之所以配成6倍浓缩（6×） ，是为了用的时候1份buffer + 5份样品混合就行，稀释成1×工作浓度。
二、三种主流配方，怎么选？
市面上的6× Loading Buffer主要有几种版本，区别在于增稠剂（甘油 vs Ficoll） 和染料组合不同【1】【2】【3】：
| 组分 | 经典甘油版 | Ficoll版【2】 | Sigma含SDS版【1】 |
|---|---|---|---|
| 增稠剂 | 30–40% 甘油 | 12–15% Ficoll 400 | 40% 蔗糖 |
| EDTA | 30–50 mM | 30 mM | 0.1 M（pH 8.0） |
| 溴酚蓝 | 0.05–0.25% | 0.06% | 0.05% |
| 二甲苯青FF | 0.05–0.25% | 0.06% | — |
| SDS | — | — | 0.50% |
| Tris-HCl | 可选（pH 7.6） | — | — |
❗ 特别提醒：
含SDS的版本（如Sigma G2526）会让蛋白质变性，适合含较多蛋白的粗提样品；但如果后续要切胶回收或做酶切，建议选不含SDS的版本，避免SDS干扰后续实验【1】【3】
Ficoll版的粘度较低，更适合窄孔或高浓度凝胶的上样，因为流动性更好，不易卡在孔外【2】
三、染料迁移参考（1%琼脂糖凝胶）
不同染料在电泳时的迁移位置不同【1】【2】：
| 染料 | TAE缓冲液中 | TBE缓冲液中 |
|---|---|---|
| 二甲苯青FF | ~4,000 bp | ~4,000–5,000 bp |
| 溴酚蓝 | ~300–500 bp | ~300 bp |
四、配制步骤（以经典甘油版10 mL为例）【3】
以下配制采用0.25%染料浓度，适合常规琼脂糖凝胶电泳。若希望显色更浅、条带更清晰，可适当减半至0.1–0.125% 。
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 取约5 mL去离子水于50 mL离心管中（便于振荡混合），称取0.025 g溴酚蓝和0.025 g二甲苯青FF，加入水中，用玻璃棒反复研磨至无颗粒感（粉末状染料较难溶解，此步骤需耐心操作），再涡旋振荡至完全溶解（溶液呈深蓝色/蓝紫色） |
| 2 | 加入0.6 mL 0.5 M EDTA母液（pH 8.0） （终浓度30 mM），混匀 |
| 3 | 加入3 mL甘油（终浓度30%），充分涡旋混匀30秒 |
| 4 | 加去离子水定容至10 mL，颠倒混匀10–15次（定容时可用玻璃量筒或烧杯，若在离心管中定容建议使用带刻度的离心管以保证体积准确） |
| 5 | 分装成小份（如500 μL/管），室温避光保存（可用锡纸包裹或存放于不透明离心管盒中）。如需长期保存（>6个月），可-20°C冻存，避免反复冻融 |
| 6 | 使用前若出现沉淀，65°C加热10分钟，涡旋混匀后即可使用 |
关键提醒【3】：
溴酚蓝和二甲苯青较难溶解，建议用玻璃棒反复研磨至无颗粒，再逐步稀释
不需要调pH，各组分溶解后直接定容即可（EDTA已提供足够缓冲能力）
使用比例：每5 μL DNA样品 + 1 μL 6× Loading Buffer，混匀后直接上样
关于Tris-HCl：本配制方案采用不含Tris-HCl的简化配方。如需添加，可在溶解染料后加入1 mL 1M Tris-HCl（pH 7.6） （终浓度100 mM），再继续后续步骤
若用于RNA电泳或需长期保存，建议用0.22 µm滤器过滤除菌后再分装
五、含SDS vs 不含SDS，怎么选？
| 你的实验场景 | 推荐版本 | 理由 |
|---|---|---|
| 纯化DNA、PCR产物 | 无SDS版【3】 | SDS会干扰后续酶切、回收 |
| 粗提DNA（含蛋白较多） | 优先尝试无SDS版；若条带拖尾严重，可换含SDS版【1】 | SDS可消除DNA-蛋白复合物，但也会产生泡沫，影响上样操作 |
| 切胶回收 | 无SDS版【3】 | 回收效率更高 |
| 蛋白样品（SDS-PAGE） | 含SDS版【1】 | 蛋白电泳专用 |
六、常见问题
| 问题 | 答案 |
|---|---|
| 配好的Loading Buffer出现沉淀还能用吗？ | 可以。沉淀通常是甘油或染料析出，65°C加热10分钟，涡旋混匀后即可恢复使用【3】 |
| 溴酚蓝和二甲苯青溶解很慢怎么办？ | 正常现象。建议用玻璃棒反复研磨至无颗粒，再逐步稀释，可大幅缩短溶解时间【3】 |
| 含SDS的Loading Buffer能用于切胶回收吗？ | 不建议。SDS会干扰DNA与回收柱的结合，回收效率明显下降【1】【3】 |
| 配好的能放多久？ | 室温避光可保存6个月以上；-20°C冻存可保存数年，避免反复冻融 |
| 可以用磁力搅拌器溶解染料吗？ | 可以，但建议先研磨至糊状再加液体，否则粉末会粘附在搅拌子或瓶壁上，溶解缓慢 |
七、省心之选：直接买现成的
称量、溶解、担心沉淀……这些琐事交给专业的来。杭州富沃克生物科技有限公司提供即用型6× DNA Loading Buffer，严格参照标准配方质控，开瓶即用，帮你把宝贵时间留给真正的实验。
📦 产品信息：
| 产品名称 | 规格 | 产品货号 |
|---|---|---|
| 6× DNA Loading Buffer | 1 mL / 10 mL | FLB606-01 |
📞 厂家联系微信号：19850855600
📧 邮箱：support@fwkbio.com
🔗 官网链接：6× DNA Loading Buffer-杭州富沃克生物科技有限公司
参考文献
[1] Sigma-Aldrich. Gel Loading Buffer 6X Tracking Dye. Product G2526
[2] b.j.vanbergenhenegouwen. Request for a 6x gel loading buffer receipt. bionet.molbio.methds-reagnts, 1999. IUBio Archive.
[3] Yeasen Biotechnology. 6× DNA Loading Buffer. Product 10213ES
